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        ABC法检测Thy-1肾炎过程中肾小球内TFPI-1的表达

        互联网

        2221
        亲和免疫组织化学 ABC 法检测 Thy-1 肾炎过程中肾小球内 TFPI-1 的表达
         
        TFPI-1是体内主要的生理性抗凝物质,除具有抗凝作用外,还有抗炎、抗血管生成、  抗增殖及诱导细胞 凋亡等多种功能。研究证明,系膜细胞能分泌TFPI-1。为研究TFPI- 1是否对肾小球肾炎具有一定的疗效,首先应用亲和免疫组织化学ABC法观察了在大鼠Thy-1肾炎过程中TFPI-1的表达情况。
         
            1.方法
            (1)石蜡切片常规脱蜡至水:二甲苯1 3~5min(冬天可延长至5-10min)一二甲苯Ⅱ 3~5min---100%乙醇l一2min---~95%乙醇11~2min一95%乙醇Ⅱ1-2rain一80%乙醇 1min一70%乙醇1min---自来水洗片刻一蒸馏水洗片刻。
            (2)去除组织内源性过氧化物酶活性:切片浸人1.5%H2 O2 -甲醇溶液,37C,301Tlln。
            (3)切片水洗:蒸馏水洗7~8次。
            (4)抗原修复(胰蛋白酶修复):0.1%胰酶消化液(100 mg胰酶+100 mgCaCl2 溶于100mlTBS中)预热30min,切片人预热的0.1%胰蛋白酶消化液,37C,30min。
            (5)切片经蒸馏水洗,再用PBS洗5minX 3次。
            (6)擦去组织周围PBS,滴加1:20正常马血清,置切片于湿盒内,37℃,20rain。
            (7)倾去正常马血清,滴加小鼠抗TFPI-1单克隆抗体1:50,37~C,lh,移至4~C冰箱过夜。
            (8)切片用PBS洗5rainX 3次。
            (9)滴加生物素化马抗小鼠IgG,37℃,1h。
            (10)切片用PBS洗5minX 3次。
            (11)滴加ABC试剂,37~C,45min。
            (12)切片用PBS洗5minX 3次。
            (13)滴加DAB显色液,显色时间为5~10rain(显微镜下控制显色程度)。
            (14)切片经蒸馏水洗,人0.1%甲基绿复染细胞核。
        (15)切片脱水、透明、封固、镜下观察。
         
            2.结果
            免疫组织化学检测结果证实,在大鼠Thy1肾炎第14天THPI-1开始表达,并随着肾炎病程的延长而表达增加。
        ABC法检测大鼠Thy-1肾炎过程中TFPI-1表达
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