细胞技术

【求助】关于测定细胞MDA的方法 参与者：m05yuwei 各位战友： 大家好！我想做细胞的MDA，不知用什么方法好。用比色方法一个样本需要多少细胞？细胞太少是不是测不出？有人说要达到一定数量才行。具体步骤可否详告？ 参与者：m05yuwei 没人帮个忙吗？ 参与者：无影无踪 MDA是丙二醛吗？如果是的就比较容易了 参与者：无影无踪 细胞内的检测需要经过适当的处理，即制成约10%的匀浆液，放置-2 ...

【求助】测细胞上清液胰岛素 参与者：hanfeng8225 各位师兄.师姐： 我养的INS－1细胞，想测细胞上清液胰岛素，请问用什么方法啊，谢谢指教！ 新手请多帮助！谢谢！ 参与者：yuqi881 检测液体中胰岛素含量可用的方法： 1、ELISA方法：需要ELISA方法检测胰岛素的试剂盒和酶标仪。 2、放射免疫方法：需要放射免疫法检测胰岛素的试剂盒和放射免疫分析仪 3、化学发光方法：需化学发光法检 ...

SP 2/0是小鼠骨髓瘤细胞株，贴壁生长，科室给学生开实验就用此细胞，所用培养基为1640，用小牛血清，浓度15%生长较好。培养孵箱为37度，5%的CO2。 开始将复苏的细胞传到小培养瓶（如25ml)，由于细胞分泌各种因子及细胞间的相互作用，因此生长较快，1-2天就可进行传代（当然要达到80-90%的融合）。 消化采用0.25%的胰酶，在显微镜下观察，看细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少 ...

【求助】免疫细胞化学固定液的选择 参与者：swift11 求助各位大虾： 我是新手上路，准备做免疫细胞化学。我要检测细胞内的一种蛋白质，用什么固定也比较好？ 参与者：琴心剑胆 4%多聚甲醛 参与者：docqian 用4% PFA固定一般比较好。 此外也可以用丙酮，或者甲醇固定。 需要说明的是，固定对有些抗体很重要，需要选择特定的固定，一般时候，抗体的说明会说明。例如，我染色细胞线粒体的时候（oxp ...

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难 ...

我养的细胞都是乳腺癌细胞，以下几种： 1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液 ...

吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。 是否需要用hanks 或 pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。如果细胞长得太老，可以先加入1ml胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前最好预热到37度。由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶 ...

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。 由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静 ...

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１）　Ａ５４９（肺腺癌） （２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３）　８０１（非小肺细胞癌） （４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液 ...

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶 ...

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。 细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。 传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

【求助】请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21 ？ 参与者：liqunfeng 请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21？？谁帮帮我啊 参与者：xiaolx 你在网上搜搜别人的实验中怎么检测的，不就知道了。 p38，我师姐做过免疫组化。 参与者：zhangyuelin1999 检测信号通路现在用的比较多的方法应该是Western blot，它是测细胞中的蛋白含量（半定量）的最好方法了，免 ...

【求助】哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 参与者：vensentgwx 哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 告诉我哪里有介绍也行，我自己在网上没找到。万分感谢！！！ 参与者：saurea 细胞膜是主要由脂质双分子层和膜蛋白构成，是一种选择透过性膜，在正常的生理机能状况下，能较好地阻碍外界离子和亲水分子的进入。但是当于其施加强度为KV/cm、持续时间为μs～ms级的电脉冲时，细胞 ...

【求助】测定NF－κB 活性 参与者：sandy99 实验中设计测定NF－κB 活性，我查的资料有以下几种选择： 1、EMSA。请教所设计的标记探针的序列？以及该实验的注意事项。（没做过） 2、抽提核蛋白，用P65抗体做Western Blot. 请问性价比较高的，好做的是哪个公司的抗体？还有啊，如果这个抗体用FITC标记过，是不是就可以用来做激光共聚焦实验？也可做WB？ ...

【求助】如何处理钙离子浓度变化数据 参与者：zufu 请教各位战友，我用荧光显微镜测血管平滑肌钙离子浓度变化，用药物刺激后可以得到钙离子时间浓度曲线，但各组之间差异较大。大家是如何处理这些数据的，因为要比较不同浓度药物刺激后钙离子的变化。 用药前钙离子稳定在一定水平，基本是一条直线，但用药后就是一个先升高后降低的曲线了，变化快，如何比较用药前后的变化，大家如何取数值并分析，是一段时间内的平均值还是 ...

【求助】fluo-3 的激发，发射波长疑问 参与者：wjg200022 最近我在测细胞内的钙浓度，用的是fluo-3 探针，但选多大的激发，发射波长很为难，有文献用的是488/515nm，有的用的506/526nm，我打算用流式细胞仪测，有做过这方面的给点指点，谢谢。 此外我找到一段原话：“Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙 ...

【求助】两个载体做共转染（瞬时转染）时是否需要有相同的复制起点\启动子吗?? 参与者：sunshine046000 各位大侠，我最近准备做共转染，用于分析目的基因的蛋白功能改变，查阅文献发现可以用含目的基因的载体和含有报道基因（b-gal）的载体做共转染以控制转染率。..请问师兄师姐们，如果我的研究目的在于分析目的基因（野生型和突变型）的表达情况以及后续的活性变化。是否最好用含相同启动子，增强子， ...

对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。 下表列出温度改变10℃时，PH值的变化情况： 例如 20℃下配制PH7.4 Tris缓冲液40℃时PH值为 7.4-(2x0.310)＝6.78 缓冲系统 pKa/20℃ pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 Pipes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0 ...

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20% ...