细胞技术

1、原理 用稀乙酸将血液稀释20倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液中的白细胞数. 2、器材和试剂 2.1器材 生物显微镜、Neubauer氏血细胞计数池、0.02ml吸管、小试管、刺血针、2ml吸管 2.2试剂 白细胞稀释液：采用3%乙酸溶液。 3、稀释液的配制 采用3%乙酸溶液。即取冰乙酸3ml，加蒸馏水至100ml混合。亦可于上述稀释液中加美蓝或龙胆紫 ...

【求助】淋巴细胞分离 参与者：zhangwenli 请教：我现在在做实验，第一步就是取健康人的外周血5ml，分离出里面的淋巴细胞.可是做了好几次都没能把它给分离出来.最后一次，我吸取了白雾状的一层，离心后看不到红色沉淀，结果放在高倍显微镜下一看，绝大部分还是红细胞，里面的淋巴细胞少得可怜.我是按照步骤一步一步的做了，怎么还是把淋巴细胞分离不出来呢?从血中分离淋巴细胞究竟需要注意什么?关键在什么地方 ...

【求助】有没有高人做过细胞-基质粘附实验啊？ 参与者：从天而降的少女 96孔扳上是先铺mtrix gel 再铺FN，还是直接铺FN就可以了呢?滴上去以后风干了就可以吗?还是要等一段时间才可以加细胞悬液?谁告诉我一下啊，多谢.我想检测肿瘤细胞的黏附能力. 有没有高人做过细胞-基质粘附实验啊？ 参与者：sunnyziyang 直接铺FN，超净台内过夜风干，使用前PBS 冲洗2遍，重新水化，再加1%BS ...

【求助】免疫磁珠分选后阳性细胞极少 参与者：fjxm81 今天第一次用MACS磁珠进行胚胎肝细胞阳性分选，我是先将细胞与兔抗鼠一抗孵育，然后再用相应磁珠（羊抗兔磁珠）进行孵育。结果得到的阳性细胞极少无比，从早上到现在饭都没有吃，结果。。。呜呜，各位高手有没有做过类似的实验，给指点一下啊！谢谢。象这样的实验，你们一般一抗会按什么浓度开始试呢？10的7次方的细胞一般是用多少μg抗体进行孵育？ 参 ...

【求助】请教各位老师在测细胞内钙离子浓度时出现的问题 参与者：haitingmao 我在用Fluo3-AM，通过激光共聚焦显微镜检测肿瘤细胞内钙离子浓度的改变时，药物作用24小时后，一个显微镜视野下仅有2－3个细胞内有荧光，且集中在细胞的某一点，而非在细胞内均匀分布。请问这是怎么回事？为什么不是所有细胞都有荧光？ 焦急等待中 参与者：ljch20011455 我前段时间刚做了细胞内钙离子浓度变化检 ...

【求助】PPARγ基因的序列 参与者：清风一号 有谁能提供PPARγ基因的序列吗?我将十分感激，谢谢！！！！ 参与者：yangea 楼主的描述不清楚，PPARγ基因的序列，哪个种属？楼主可以按照下述方法自己查找所需要的： 1、打开ncbi的主页http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 2、在search项下拉菜单中选择gene，同时在右边for查 ...

一、准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。 1、清洁、消毒、液体 直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子 直接接触细胞的用品要彻底消除微生物 超净和消毒过的样品要绝对密闭保存，标记消毒时间 ...

污染的类型 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 一、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现 ...

1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM） 2、为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研 ...

1、取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。 2、将培养基换成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基，处理1~2小时。 3、将细胞培养液倒掉，马上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中，并在1200r/min离心4min。 4、将上清液倒掉，剩 ...

体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后能保持结构和功能上的某些特点 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免 ...

概述 Spallanzani（1776）最早发表了冷“处理”对“细胞”生命活动影响的报道，他用雪冷冻玻璃瓶中的马精子10多分钟之后，再将玻璃瓶放回室温下，发现了一个令人惊奇的现象，那些原本已经不动了的精子又“复活”了，就好象是刚从输精管排出来的一样，冷处理延长至数十分钟，情况依然如此。于是，他认为冷不能杀死精子。大约100年 ...

1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体 ...

1、原代培养： 健康成年白家兔空气栓塞处死立即取出眼球1∶1000庆大霉素生理盐水冲洗干净置超净工作台无菌操作。角膜缘剪开去除角膜、虹膜将晶状体前囊膜连同赤道部囊膜撕下Hank液冲洗剪成1mm×1mm小块上皮面向下置25mL组织培养瓶内贴壁培养。把培养瓶轻轻翻转加入适量的加入含15%胎牛血清的DNEM营养液囊膜片在瓶内的上面而培养液在下面。置于37℃、5%CO2、95%空气、100%湿 ...

材料与试剂： 镊子、剪子、培养皿 离心管、培养瓶、吸管、滴管 200目筛网 胶原酶（10ml）（20mg胶原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升双蒸水）国外也用培养基配. 方法： 1、取无菌条件下新鲜切除的人腹部皮下脂肪组织约5－10克，放入培养皿，用1×PBS冲洗2－3次，充分洗去血污，剔除结缔组织和可见血管。 2、充分剪碎脂肪组织为1mm×1mm的小块。 3、将其加入到 ...

材料与方法： 材料 : 培养皿、培养瓶、烧瓶、试管，玻璃针等。 眼科剪、眼科镊、手术刀片。 5%CO2孵箱、PH计。 恒温水浴箱。 PMi1640培养基，D-Hank’s缓冲液 、胎牛血清，内皮生长因子（ECGF），青霉素，链霉素戊巴比妥钠等。 方法： 1、取材：4～6ｗＷｉｓｔａｒ大鼠 大剂量2%戊巴比妥钠麻醉处死，将处死后的大鼠浸入75%酒精中，放入超净台。在无菌状态下剪开胸腹腔 ...

【求助】关于ROS的检测方法，谢谢 参与者：llemontree ROS的检测方法都有哪些呢？比如HVA assay，luminol-enhanced chemiluminescence 方法等等，都有什么区别呢？谢谢 参与者：lwjssry ROS的测定方法 细胞内ROS的检测可用DCF法 细胞外可用ROS试剂盒，步骤按说明书进行。 以下是其他信息和文献： key words： 关键词：二氯荧 ...

【求助】启动子片断插入到了pgl3basic载体中，为什么没有检测到荧光？ 参与者：smile1688 我把一个基因的启动子片断插入到了pgl3basic载体中，但是却没有测到荧光。阳性对照，即Pgl3 control检测到荧光。 推测： 1、启动子片断错误。 1000bp，已测序验证，在ATG前40bp，推测离转录起始位点还有200bp以上。 2、细胞的转录效率太低。 但是Pgl3 contro ...

【求助】急！请问淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞需要设门吗？ 参与者：二分之一幸福 分析T细胞亚型，通过淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞，需要向白细胞那样设门吗？谢谢！ 参与者：liu2050 淋巴细胞分离液分离出来的是单个核细胞而不仅仅是单纯的淋巴细胞，还包括nk等一些其他种类单个核细胞。你要分离T细胞亚型，肯定需要2色以上标记，一种是总t细胞的标记，另外一种才是你需要检测的细胞亚型的标记。用总T的标记 ...

倒去培养基，先加入PBS1ml，再加入0.25％胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使之分布均匀；约10秒。 将培养瓶迅速转至镜下观察，镜下见细胞触角变钝，细胞变圆，将瓶侧立回到无菌台内，到掉胰酶，加入2mlDMEM培养基（内涵20%胎牛血清），终止消化，弯管吹打成单细胞，可再在镜下观察，确定是否吹打完全。 按1：3或1：2传代，加入适量新鲜培养基后，1.5-2.0ml。放入CO2培养箱。 注意：时间宁短 ...