细胞技术

弃血清---PBS洗一或两遍---加1-2ml的消化液（0.1%的胰酶+0.02%的EDTA）消化45秒作用（不用放回培养箱，细胞面紧贴自己的手掌心，平放）---弃去胰酶后让残留的胰酶再作用1分钟----立即加含血清培养基终止胰酶的作用---轻轻吹打细胞很容易就脱离瓶壁。注意，吹打次数不要太多，机械损伤对细胞的损害非常大，吹打过程中也不要有太多气泡，以免气泡的剪切力损害细胞。 一般而言，细胞消化传 ...

【求助】悬浮细胞如何转染？ 参与者：独钓寒江雪 请问有人做用悬浮细胞转染细胞么 具体转染过程是怎么样的呢 我打算用脂质体做转染 但是没有经验所以想请问一下做过这方面的人 非常感谢 参与者：DXY721 悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。 其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达 ...

【求助】用fugene 做过转染的进来！！！ 参与者：yinqiscott 小弟准备用罗氏公司的fugene HD来做细胞转染，但是一点不明白，在载体和质粒无血清孵育15分钟后，加到细胞里，这时候的培养液应该用无血清的还是有血清的呢??? 参与者：shilly 我们用的是fugene 6，加到细胞里面的时候是有血清的培养液 说明书上说不影响，如果要换无血清培养液也要几个小时以后换。 参与者：scm ...

【求助】是否瞬转成功的检测 参与者：zhou0958 我现在想做瞬转，然后24，48，72小时后检测转染的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体，这种载体是不带荧光的.请问各位大侠，我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢? 参与者：DXY721 检测转染成功与否的方法很多，流式，RT-PCR，WB应该都可以 参与者：easticebird 是不是可以和有荧光的一起转染 ...

吸出培养瓶中的培养基用Tr-EDTA洗1次； 加入刚解冻的Tr-EDTA少量，轻轻摇晃，让所有细胞与其充分接触。置于37度培养箱作用2-3min 在镜下看到细胞圆缩，右手拿细胞瓶呈水平方向与左手掌托（肉较多处）轻轻磕n次，可以看到细胞哗哗往下掉，立即加培养基终止消化。 用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：3分瓶。 ...

【求助】pIRES2－eGFP转染细胞有经验者请帮忙？ 参与者：水仙子2005 最近用pIRES2－eGFP做转染，可是看不到荧光（就连空载体也没有），由于实验要在3月底出结果，所以现在很急，准备寒假加班加点做。 有人说这个载体的GFP表达很不稳定，不知道有没有人用过这个载体，能否给点建议，对于好的建议愿以积分相赠 参与者：Crazyvirus 不知你是固定以后观察荧光还是转染后直接看的，若是固定 ...

我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。 1、0.25%胰酶新鲜解冻不需要预热。 2、倒掉培养瓶中的培养基并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。 3、加入约1-2ml的胰酶晃动瓶子使液体浸润瓶底。 4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟） 5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）见 ...

1、 0.25%胰酶先解冻，并置入孵箱中预热20分钟。 2、 倒掉培养瓶中的培养基，并用PBS洗两次。 3、 加入月1.5ml的胰酶，并晃动瓶子，使液体浸润瓶底。 4、 将瓶置入孵箱约2分钟 5、 镜下观察，见细胞边缘折光增加，即可加入含血清的培养基终止消化。 6、 吹打20次左右，细胞就能脱壁了。 7、 稀释，分瓶接种 ...

细胞：猪肾细胞系(IBRS-2) 猪 国内 来源： 猪 生长类型：贴壁生长 传代步骤： 弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞３次并到尽所有液体-->加入１ml无钙镁水，用巴氏吸管滴１－２滴２.５％的胰酶-->放入37度二氧化碳温箱中消化１－２-->弃去胰酶，加入２０ml含１０％小牛血清的ＭＥＭ生长液，拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分2瓶--& ...

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。 大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。 我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已 ...

【求助】GenBank使用的疑问 参与者：ctyw708 众所周知，引物设计常常用到GenBank，但是我查到的是mRNA的序列，用的软件Primer Premier 5.0，里面要输入的是DNA sequence，该如何转换，按照碱基配对原则进行变换（reverse complemently）就可以了？ 能利用软件对文献的引物进行评价么？ 谢谢路过的大侠！ 参与者：银色黎明 查cDNA序列嘛. ...

此种细胞的培基最好用是DMEM！以前我们用1640，但生长及其缓慢。 正常情况下，2天换一次液4-6天传代一次. 传代过程： 1、直接倒掉DMEM培基 2、pbs将细胞洗2次 3、倒掉pbs 4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培养瓶 5、水平放置培养瓶，消化3－5分钟 6、显微镜下观察：细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少数细胞漂浮起来就可终止消化。 7、加入完全培基 ...

【求助】肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 参与者：greentrees 肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 肝素和硫酸类肝素都属于糖胺聚糖吗？ 不知道发在这里合适不合适，有知道的同道可否告知一下 参与者：liuzeyi2002 肝素（heparin）属于糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）类生化药物，是一类在结构上不均一、聚合程度上高度分散的硫酸多糖，一般指肝素 ...

特性：悬浮细胞 培养条件：37度 5% CO2培养（方瓶站立培养） 营养需求：1640+15%FCS+10%TPB+100U双抗+100U两性霉素，状态不佳时适当地加2%鸡血清或2%马血清 生长特性：细胞对密度没有高的要求，生长较快；但对pH值要求高，需要在6.8-7.2，不能过高。 传代：对于隔夜的细胞只需要将细胞分为两/三孔/瓶即可，对于细胞液过酸时，则将细胞悬浮，1000rpm离心后，弃取上 ...

【求助】关于葡萄糖转运实验的一些问题 参与者：qqhhrainbow 1、我买回来的氚-2D-葡萄糖，包装上标注的0.25mci……0.25ml in ethanol： water 9：1……这些信息如何理解，如果我要达到1 μCi/ml的加药量，应该从包装瓶里去出多少加入1ML水呢？ 2、还有就是最后收集细胞的问题，为什么有的实验是将 ...

【求助】caspase-3的检测方法 参与者：yansunqin 在本版里有看到过有关caspase-3的检测方法 （1）：免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞 （2）：western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活花 （3）：RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析系统处理， ...

培养条件：RPMI-1640培养液，10%（胎牛或小牛）血清，5%CO2，37度饱和湿度孵箱培养。 细胞生长状态：上皮样贴壁生长。 传代： 细胞长满95%->弃培养液->0.25%胰酶消化2min->弃掉胰酶->加入培养液吹打贴壁细胞，将细胞悬液分瓶传代。若一传二，则3天长满；若一传三，则需要4-5天长满。 ...

红血球脆性试验（RBC Fragility test）是血液实验室用以检查贫血疾病的项目之一，特别是针对遗传性球状红血球贫血。本次实验在探讨新鲜检体之立刻反应与经37℃孵育24小时后检体反应结果的相关性及经孵育测试的参考值，并对以不同的转速离心做评估。结果发现经37℃孵育24小时的步骤是不可省略的，因只有如此才可筛检出具轻微症状的病人；我们以25位体检病人求得经37℃孵育24小时结果的参考值，分别 ...

我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药，摸索发现消化液的配方为0.25％的胰酶+0.02%EDTA 就行了，要配在PBS中，如果能加Hepes那就更保险了（有一次实验室Hepes用光了，配液时没加Hepes，照样没问题） 消化步骤：吸走培液后最好用PBS过一遍－>50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液－>37º ...

【求助】如何挑蚀斑？ 参与者：lxwgww 最近需要进行病毒的单克隆化，在论坛看到可进行挑蚀斑，受益很多！因为病毒是细胞结合毒，所以想参考细胞的单克隆化方法！ 看到有用滤纸挑细胞克隆的方法，不知道具体如何操作，是否可行？ 希望做过相关试验的战友能够提供细胞结合毒纯化的方法！？？ 参与者：smh9839 拿微量移液器，安黄枪头的，100μl或200μl的均可。 等蚀斑形成后，先在板子背面 ...