细胞技术

做实验前要先学会冻存，以备自己在后面的实验中能保持同一来源、稳定可靠的细胞，且可减少污染或其它不利影响。

转管/转瓶培养，试管或转瓶固定在支加上，倾斜度为5°～10°左右，或将转瓶放在一排排转轴之间，使转瓶随着转轴以每小时6～12 转缓慢转动。

以表皮细胞为例，用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞。

组织Caspase-3活性测定操作规程

TUNEL细胞凋亡检测程序

1.实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminar flow）以紫外灯照射30-60分鐘灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开啟无菌操作台风扇运转10分鐘后，才开始实验操作。 2.每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共用培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。 3.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完即应移出， ...

动物细胞培养开始于本世纪初1962年，其规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法。

本文来自Cyagen赛业经过多年的干细胞（特别是MSC）研究，已经开发出多种成熟的MSC和ADSC等干细胞的分化诱导产品。

美国密歇根大学的3T3-L1细胞分化的PROTOCOL(非常详细) 3T3-L1 Differentiation Protocol MATERIALS Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; GibcoBRL-Cat# 11965-084: high glucose with L-glutamine with pyroxidine HCl witho ...

一、试剂和缓冲液配制 1、胎牛血清（氯化十六烷基吡啶） （1）解冻胎牛血清 （2）在56℃加热30分钟（脱补体作用，盖上瓶） （3）取25ml上述液体放在无菌的50ml的falcon里分馏 （4）在-20℃冰冻馏份 2、磷酸盐缓冲液（PBS） （1）无钙镁离子的100ML的PBS（10×）（生命技术） （2）900ML蒸馏水 （3）2克葡萄糖 （4）在无菌的FALCON里过滤，分馏，在 ...

一、有限稀释法 材料： a、96孔细胞培养板等； b、HT培养基； c、活力强的杂交瘤细胞； d、小鼠腹腔细胞。 方法： a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。 b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。 c、按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤 ...

实验步骤 （一）、取SD 大鼠一只，实验时断椎处死。 （二）、在无菌条件下快速自肛门上2cm 取结肠10cm 左右，生理盐水中反复灌肠冲洗。 （三）、移入含300U/ml青霉素、300U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡，肠段内外各15min。 （四）、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中（培养板预先铺上705胶），在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行 ...

1、舒林酸和尼美舒利的溶解方法的问题： 问：最近在做试验时发现舒林酸和尼美舒利两种药物很难溶解，加入DMSO后可以溶解，但是再加入1640培养液稀释时又出现结晶，而且很难溶解。有什么好的办法吗？ 答：(1)可以先把所需药母液加如一个小安剖瓶，再加入培养基，用枪多吹打几分钟就会溶解。 (2)如果还是溶解不了，可以换用乙醇试试。 (3)配制药母液时浓度要尽量高，这样稀释后培养基中的DMSO浓度才越低。 ...

问：盐酸乙醇该怎么配置呢？ 答：在丁香园里搜索“盐酸乙醇”，有很多配制的网页，看你选择，比如“0.5%盐酸乙醇液如何配制 分析技术讨论版thank_you” http://www.dxy.cn/bbs/post/search?ei=UTF-8&action=Search&words=%E7%9B%90%E9%85%B8%E4%B9%9 ...

PC12传代的消化 丁香园wangpengljr的问题： 我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶 ...

丁香园ivy_mayan的问题： 在做PC12的H2O2损伤模型时，由于细胞经过H2O2的冲击，大多活性不好了，所以贴壁性变差，结果在测MTT时由于要去掉上清液，细胞会被一同吸走，这样所测吸光值就不准了，请问大家，怎么可以使PC12贴壁更牢（即使经过损伤冲击）？ 丁香园george的观点： 1.细胞培养板的选择：一定要用进口的培养板，国产的大多贴不好。 2.尽量使细胞处于良好的状态，包括培养液要新 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： 未分化的PC12在什么情况下会使它产生分化，从而成为分化的PC12？？是不是NGF有这样的作用？除此以外呢？ 丁香园sudajyou的观点： pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS 5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。 丁香园忘记宝儿兔兔的问题： 关于pc12细胞即鼠 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： PC12细胞是什么细胞？或者说它的形态是什么样的？来源呢？ 丁香园wack_lry的回答： 来自大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系，它与神经细胞在发生学上均来源于神经脊；在结构、功能上与神经元有很多相似之处，与神经元比较又相对容易培养，故普遍将PC12细胞用作研究神经的细胞模型。 丁香园balabom的问题： 才从别人那里拿来已传代的pc12养，感觉长得很快，两天就要 ...

丁香园myl0605的观点： 前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助! 培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。 分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细 ...

丁香园网友doctorwyz： 你们好。在我发这份帖子的时候我还在犹豫，是否应该将我的经验如实地告诉给大家，因为所谓的黑胶虫污染十分普遍，难以消除，很多人谈黑色变，我究竟有怎样的方法消灭黑胶虫，我的观点和方法是否能得到大家的认可，无论怎样，我相信我的经验绝对值得大家借鉴，会对那些困扰于所谓的黑胶虫污染的战友们有所帮助。 首先，世界上根本就没有什么黑胶虫，没有人知道黑胶虫的英文名字是什么，没有哪个权 ...