细胞技术

PriCells: 正常视网膜米勒细胞原代培养实验材料：1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 消化液：0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明质酸酶混合消化液；4. 消毒无菌的手术器械若干；实验方法：1. 取材（1）取自人的供体眼球； 1） 经常规消毒程序消毒后，于锯齿缘 ...

PriCells: 正常晶状体上皮细胞原代培养实验材料：1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 器械：无齿显微小镊子2把、培养板和培养皿若干；4. 培养液：为含15%胎牛血清的DMEM培养液；实验方法：1. 取材1）摘取动物或人的供体眼球，作常规消毒处理；2）用刀片沿角巩膜缘环 ...

PriCells: 正常人关节软骨细胞的长期培养实验材料：1. 软骨细胞来源：20—24周自然流产胎儿的股骨和胫骨；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 消化液Ⅰ：2mg/ml胰蛋白酶和2mg/ml胶原酶混合消化液，用PBS液配制；4. 消化液Ⅱ：0.5mg/ml胶原酶，用培养液Ⅰ配制 ...

正常滑膜细胞原代培养实验材料：1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；实验方法：1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织 ...

PriCells: 正常骨内成骨细胞原代培养实验材料：1. 骨组织来源：新生或胚胎大鼠、兔、人类胚胎或手术切除之骨组织；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 消化液：0.25%胰蛋白酶溶液，1mg/mlⅡ型胶原酶溶液；4. 培养液：RPMI 1640培养基，配制培养液时加入15%的小牛血清，并用5.6% NaHCO ...

正常成熟破骨细胞原代培养实验材料：1. 细胞来源：新生大鼠或兔，妊娠6个月以内的引产胎儿等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 细胞支持物：薄骨片、盖玻片；4. 培养液：199培养基、MEM或DMEM培养基均可，须补加15%—20%小牛血清、25mmol/L HEPES及青霉素100IU/ml ...

PriCells: 正常关节软骨细胞的短期培养实验材料：1. 软骨细胞来源：动物材料可选用未成年兔的膝关节、鸡胚胸软骨。人体材料可取自引产胎儿或成年人手术切除的软骨标本；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 消化液：0.2%胶原酶Ⅱ溶液，用PBS液配制，过滤除菌；4. 培养液：RPMI164 ...

PriCells: 细胞内糖类染色方法—过碘酸席夫反应法基本原理：过碘酸是一种强氧化剂，过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，乙二醛基继而与Schiff试剂结合，Schiff试剂本为无色亚硫酸品红复合物，但它与乙二醛基结合后形成紫红色反应物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖（包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等）的乙二醇分子的多寡。基本原理：1. 席夫试剂的制备（1） 称取0.5 ...

PriCells: 原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备：1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen缓冲液和1份吉姆萨母液混合即得染色液；贴壁细胞染色步骤：1. 去除培养器皿 ...

PriCells: 原代悬浮细胞吉姆萨染色法涂片法：1. 用含有5%—10%血清的等渗液将培养的细胞调制成密度为106个/ml的细胞悬液；2. 将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端，用另一块干净的载玻片，按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上；3. 载玻片在空气中干燥后，再用甲醇固定；4. 对涂有细胞的载玻片进行染色；5. 注意，为避免细胞皱缩应尽快使涂有细胞的载玻片干燥，可摇动载玻片或用吹风机的冷风 ...

PriCells: 原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法原理： 苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度，如果染料与含有脂类的试样接触，便有大量染料进入脂类物质的结构内，使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。配制试剂：1.苏丹红Ⅲ染色液：将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70 ...

PriCells: 台盼蓝染色法材料：1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管；2. 试剂：0.4%台盼蓝染液；3. 台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；4. 生理盐水：100ml；操作步骤：1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细 ...

PriCells: 苏木精-伊红（HE）染色染液制备：1. 苏木精染液（1） 称取0.5g苏木精、5.0g铵矾或钾矾和0.1g碘酸钠加温溶于70ml蒸馏水中；（2） 加入30ml甘油和2ml冰乙酸充分混匀后过滤即成母液；（3） 母液可长期保存。用蒸馏水以1：20稀释母液即成工作液。工作液也较长时间储存，但每次染色前宜过滤，去除氧化膜；2. 伊红染液伊红有醇溶 ...

PriCells: 原代细胞骨架的染色方法微丝的显示方法步骤：1. 用PBS液漂洗盖片培养的原代细胞3次，每次30s；2. 用2%的甲醛/PBS液固定原代细胞3min；3. 用0.5%的三硝基甲苯/PBS处理3次，每次10min；4. PBS漂洗3次；5. 用罗丹明（rhodamine）标记的鬼笔环肽（phalloidin）（1：10）室温中反应15min；6. ...

PriCells: 原代细胞富尔根（Feulgen）反应显示DNA基本原理：显示DNA的传统方法是富尔根（Feulgen）反应，切片先用稀盐酸处理，DNA经弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。原理同PAS反应，使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响，故染色具 ...

原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法基本原理：吖啶橙（acridine orange，AO）是一种常用荧光染料，吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力，但有一定的特异性，即结合后发不同颜色的荧光，DNA呈亮绿色，而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷，既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直接染色观察活原代细胞或固定染色观察原代细胞均可。吖啶橙对活原代细胞毒性小， ...

PriCells: 原代细胞甲基绿-哌咯宁法显示DNA和RNA基本原理：甲基绿（methyl green）和哌咯宁（pyronin）均为碱性染料，因此可与带负电荷的磷酸根形成盐。甲基绿分子有2个正电荷，易与双链DNA分子结合使原代细胞核内的DNA呈蓝绿色。哌咯宁分子有一个正电荷，易与单链RNA分子结合使原代细胞质和核仁内的RNA显示红色。也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关。配制试剂：1 ...

PriCells: FITC标记抗体-Chadwick氏法 试剂：抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞；材料：离心机及离心管、三角烧瓶（25ml）、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯（500ml）等；方法与步骤：1. 抗体的准备。用0—4℃ pH8.0的PBS将免疫球蛋白溶液浓度稀释 ...

FITC标记抗体-Marsshall氏法材料：抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶（25—50ml）、冰及冰槽（或1000ml烧杯）、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯（500ml）、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等；方法与步骤：1. 抗体的准备。量取适量已知浓度的球蛋白溶液 ...

PriCells: Isolation culture and purification of Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells (HPMECs)1.HPMECs were isolated from lungs resected from tissue of normal human or adult patients with m ...