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        原代细胞甲基绿-哌咯宁法显示DNA和RNA

        互联网

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        基本原理:

        甲基绿(methyl green)和哌咯宁(pyronin)均为碱性染料,因此可与带负电荷的磷酸根形成盐。甲基绿分子有2个正电荷,易与双链DNA分子结合使原代细胞核内的DNA呈蓝绿色。哌咯宁分子有一个正电荷,易与单链RNA分子结合使原代细胞质和核仁内的RNA显示红色。也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关。

        配制试剂:

        1. 0.2mol/L pH4.8的乙酸缓冲液的配制

        将1.2ml冰乙酸加蒸馏水定容至100ml,在使用时再加2.72g乙酸钠(NaAc·3H2O),待完全溶解后,即可使用;

        2. 甲基绿-哌咯宁染色液配制

        A液:取2g甲基绿加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸缓冲液中即可;

        B液:取1g哌咯宁加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸缓冲液中即可;

        用时将A、B液按5:2混合即可。

        染色步骤:

        1. 取培养于盖玻片上的贴壁原代细胞,用Hanks液漂洗三次;

        2. 70%乙醇溶液固定10min,取出后晾干;

        3. 滴加甲基绿-哌咯宁染色液覆盖盖片样品,染色15min;

        4. 蒸馏水冲洗3次;

        5. 95%乙醇分色,晾干;

        6. 用二甲苯透明,用光学树胶封片后观察。

        结果:

        原代细胞核因含DNA呈绿色,细胞质及核仁因含RNA呈红色。

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