细胞技术

细胞外基质与一个细胞的肌动蛋白细胞骨架之间的物理联系由被称为“黏着斑”（focal adhesion）的细胞器组成，它们通过“整联蛋白”（或称整合素）发挥作用。它们在人体生理中具有根本的重要性，因为它们调控细胞黏附、机械传感和控制细胞生长及分化的信号。现在，“黏着斑”的分子架构已通过利用三维超分辨率荧光显微镜在纳米尺度上观测蛋白组织方式而被确定。

当代最活跃的学科--生命科学与生物学的关系 生命科学的基础和核心是生物学生物学是生命科学各个领域的基础和核心。生物学是研究所有生命形式及其活动的基本规律、揭示生命现象本质的一门科学。它研究包括人类在内的所有生命形式的起源演化，生长发育，繁殖，遗传变异和消亡等生命现象的规律和本质，以及各种生物之间，生物与环境之间的相互关系和相互作用。最近半个世纪，兴起了以分子生物学为核心的现代生命科学。它为 ...

癌细胞的特征不死性迁移性和失去接触抑制 癌细胞有3个基本特征：不死性、迁移性和失去接触抑制。当然，癌细胞还有许多不同于其他正常细胞的生理、生化和形态特征。 (一)癌细胞的形态特征 癌细胞大小、形态不一，通常比它的源细胞体积要大，核质比显著高于正常细胞可达1：1，正常的分化细胞核质之比仅为1：4--6。并可出现巨核、双核或多核现象。核内染色体呈非整倍态(aneuploidy) ...

肿瘤形成的外部化学生物和物理致癌物因素 人类肿瘤约80％是由于与外界致癌物质接触而引起的，根据致癌物的性质可将其分为化学、生物和物理致癌物三大类。根据它们在致癌过程中的作用，可分为启动剂、促进剂、完全致癌物。 启动剂是指某些化学、物理或生物因子，它们可以直接改变细胞遗传物质DNA的成分或结构。一般一次接触即可完成，其作用似无明确的阈剂量。启动剂引起的细胞改变一般是不可逆的。 ...

细胞凋亡(cellapoptmis)是借用古希腊语，表示细胞像秋天的树叶一样凋落的死亡方式。凋亡细胞的主要特征是： ①染色质聚集、分块、位于核膜上，胞质凝缩，最后核断裂，细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体。 ②凋亡小体内有结构完整的细胞器，还有凝缩的染色体，可被邻近细胞吞噬消化，因始终有摸封闭，没有内溶物释放，故不会引起炎症。 ...

当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团(inner cell mas)的细胞即为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)。人类胚胎干细胞是在人胚胎发育早期――囊胚(受精后约5--7天)中未分化的细胞。囊胚含有约140个细胞，外表是一层扁平细胞，称滋养层，可发育成胚胎的支持组织如胎盘等。中心的腔称囊胚腔，腔内一侧的细胞群，称内细胞 ...

根据结构的不同，细胞划分为两大类：原核细胞和真核细胞。原核细胞结构比较简单，由细胞壁、细胞膜、细胞质和核区组成；核区只是一团核物质，外面没有界膜，不是一个成形的细胞核，但有一个环状DNA分子，它与RNA、酶等组成遗传信息的转录与翻译系统；细胞质中也没有细胞器。 细菌和蓝藻是原核细胞。而除细菌和蓝藻之外的所有单细胞和多细胞的动植物，都由真核细胞组成。真核 ...

生物技术干细胞工程 干细胞工程是在细胞培养技术的基础上发展起来的一项新的细胞工程。它是利用干细胞的增殖特性、多分化潜能及其增殖分化的高度有序性，通过体外培养干细胞、诱导干细胞定向分化或利用转基因技术处理干细胞以改变其特性的方法，使干细胞为人类服务。按分化潜能的大小，干细胞基本上可分为三种类型：一类是全能干细胞，它具有形成完整个体的分化潜能。胚胎干细胞就属于此类，它具有与早期胚胎细胞相似的形 ...

细胞凋亡的简介和检测 细胞凋亡（apopotosis）是指细胞在一定生理和病理条件下，遵循自身程序，由基因调控的主动性死亡过程。细胞凋亡具有重要的生理和病理意义，它是多细胞生物发育和组织平衡的主要机制，并且与肿瘤、神经推行等发病机理有关。许多病理生理因素如自由基、辐射、DNA损伤、剥夺生长因子以及死亡受体和配体作用等都能引起细胞凋亡。常用方法： 1.细胞膜磷脂酰丝氨酸检测法 ...

细胞膜的凋亡检测的原理Annexin V-FITC&PI凋亡检测试剂盒 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时， ...

单核/巨噬细胞的分化成熟及组织分布 单核／巨噬细胞均来源于骨髓干细胞。发育成单核细胞后，进入血流分布于各种器官组织，并有不同的命名。单核巨噬细胞的组织分布 成熟的单核吞噬细胞表达多种表面分子．其中受体多达数十种，如免疫球蛋白的Fc受体FcyRI(CD64)、FcγRⅡ(CD32)、FcγRⅢ(CDl6)，补体受体CRl和CR3和各种模式识别受体(包括甘露糖受体、清道夫受体、TLR ...

杂交瘤细胞株稳定性的检查 在液氮中保存的细胞株及体外传代培养的细胞株，都需要定期检查染色体数和抗体产生能力，因有些杂交瘤细胞会逐渐丢失染色体，使产生抗体的能力丧失或减弱。此时需及时进行克隆化，保留稳定分泌抗体的细胞株。 1． 杂交瘤细胞染色体检查 【材料和试剂】（1） 秋水仙素。（2） 甲醇，冰醋酸。（3） Giemsa染液，玻片。【操作步骤】（1） 取传 ...

免疫磁性微珠分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞【材料及试剂】（1） 磁性激活细胞分离器（MACS）：MACS柱（C型，可结合2×108个细胞）生物素标记的抗CD4单抗和抗CD8单抗（2） 生物素标记的羊抗鼠IgG F(Fab)2（3） FITC标记的亲和素（4） 生物素标记的磁性微珠（5） MACS柱染色洗涤液、MACS柱洗脱液（含1%牛血清白蛋白的PBS） ...

磁化细胞分离器分离法（MACS）分离NK细胞 从外周血分离单个核细胞，以粘附法除去其中的单核细胞后，以尼龙棉柱法除去其中的B细胞，余下的T细胞和NK细胞以磁化细胞分离器(MACS)进行分离。有两种方法：阴性选择法，在反应中加入抗CD3抗体，使T细胞与之特异结合后形式磁性分离柱内，以除去标记的T细胞，洗下的未标记细胞；阳性选择法，在反应中加入抗CD16及抗CD56，使NK细胞与之特异结合形成 ...

不连续密度梯度分离法分离NK细胞 NK细胞即自然杀伤细胞，是一群具有自然杀伤能力的大颗粒淋巴细胞，无粘附作用。它们不需要抗原激活，也没有MHC限制性，即能直接杀伤肿瘤细胞。成熟的NK细胞离开骨髓进入外周免疫器官，主要分布在脾脏和外周血中，约占外周血的3%。【试剂及配制】（1）pH 7.3柠檬酸缓冲液柠檬酸 327mg柠檬酸钠 2.63g碳酸氢钠 222mg葡萄糖 2.55mg ...

Percoll密度梯度离心法分离嗜碱性粒细胞 正常人血液中，嗜碱性粒细胞是数量最少的一种白细胞（2.8×104/ml）因此也是最难分离、提纯的一种细胞。目前仍然用密度梯度离心法分离嗜碱性粒细胞。【试剂及配制】（1） 无Ca2+、Mg2+Hank’s液（2） Percoll混悬液：取购买的Percoll(Pharmacia)90mlHBSS 9mlHEPES ...

用有机溶剂固定细胞爬片、甩片或切片 所有的固定方案必须做到：①防止抗原丢失；②维持细胞正常结构；③尽量使抗原保持能与抗体结合的状态。 常用的固定剂种类很多，固定剂的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。固定剂可分为两大类：有机溶剂和交联剂。有机溶剂，如乙醇和丙酮能够去除脂类物质，使细胞脱水，把蛋白质沉淀在细胞结构上。交联剂一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来，形成一个相互连接 ...

当纯净甲醛在水溶液中溶解时，会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一，在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质，因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时，能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时，形成一网状结构，把细胞的各个结构成分连接起来。 单独用多聚甲醛固定细胞不能使抗体进入细胞内，在检测细胞内抗原时，标本经多聚甲 ...

51Cr释放试验测定NK细胞活性【基本原理】Na251CrO4能进入到增殖的细胞内，与细胞浆蛋白质牢固地结合。当标记的51Cr细胞受到损伤或死亡之后，即可释放出51Cr。51Cr辐射γ射线，通过测定受损伤或死亡靶细胞释放到上清中的51Cr，即可计算出NK细胞活性。【试剂及材料】（1） 铬酸钠（Na251CrO4）: 51Cr的物理半寿期为27.72d。（2） 十二 ...

LAK/TIL细胞的制备1、LAK细胞的制备【试剂及材料】①PHA②rhIL-2③20％NCS-RPMI-1640培养液【操作方法】（1）常规分离PBM或将正常人外伤摘除的脾脏按常规方法制备成单个脾细胞悬液，用含20％NCS的RPMI-1640完全培养液调整细胞浓度至1×106/ml；（2）将上述细胞加入24孔培养板孔中，同时加入60μg PHA，rhIL-2（终浓度为500U/ml），将细胞置 ...