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        杂交瘤细胞株稳定性的检查

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        在液氮中保存的细胞株及体外传代培养的细胞株,都需要定期检查染色体数和抗体产生能力,因有些杂交瘤细胞会逐渐丢失染色体,使产生抗体的能力丧失或减弱。此时需及时进行克隆化,保留稳定分泌抗体的细胞株。

        一、杂交瘤细胞染色体检查

        材料和试剂

        1. 秋水仙素。

        2. 甲醇,冰醋酸。

        3. Giemsa染液,玻片。

        操作步骤

        1. 取传代培养24h的细胞,加0.1ml秋水仙素,放37℃水浴4h。

        2. 收集细胞2000r/min×10min离心弃上清,沉淀中加入0.075mol/L KCL 10ml,用滴管吹吸均匀,放37℃水浴15~20min,使细胞肿胀。

        3. 离心弃上清后,沉淀细胞用甲醇3份、冰醋酸1份的混合液10ml固定20min。

        4. 2000r/min离心10min,弃上清后取沉淀细胞涂片,自然干燥。

        5. 用Giemsa染色,油镜检查。小鼠脾脏B细胞染色体约40条,SP2/0细胞染色体68条,杂交瘤细胞染色体100条左右。

        二、McAb产生能力检查

        取冻存复苏传代培养的杂交瘤细胞培养上清或诱生小鼠腹水,检测其抗体效价,特异性及亲和力,一旦发现杂交瘤细胞产生抗体能力减弱,应及时进行克隆化,保留稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。

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