细胞技术

由武汉大学生命科学院教授、武汉禾元生物科技有限公司董事长杨代常领衔的研发团队历经3年的研究与开发，利用水稻种子表达出多功效的重组人碱性成纤维细胞生长因子。相关论文 “Expression of a Functional Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor from Transgenic Rice Seeds”( ...

一、材料与试剂 1. 20%多聚甲醛 2. Na2EGTA 3. 三盐酸亚精胺 4. 亚精胺 5. 1，4-哌嗪二乙烷磺酸钠pH7.4 6. β-巯基乙醇 7. 油红 8. 异丙醇 9. 二硫苏糖醇 10. 0.2 μM 过滤器 11. ...

Hoechst染色：hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合有hoechest33342和hoechst33258两种（主要为凋亡活细胞）在紫外光下将核染为蓝色。Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。hoechsthoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33 ...

1. 酸性品红：酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容於水，略溶於酒精（0.3%）。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、医学教|育网搜集整理髓部等薄壁细胞和纤维素壁。它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。 2. 刚果红：刚果红 ...

实验目的 1. 掌握光电型血细胞计数器的基本原理。 2. 了解施密特电路在脉冲整形方面的应用。 实验器材 直流稳压电源1台、示波器1台、万用电表1台、面包板1块、施密特集成电路CD40931块、光敏电阻1个、电阻、导线若干。 实验原理 光电型血细胞计数器的原理是利用换能器将血细胞流动过程中所出现的非电量转换为对应的电脉冲信号，经过信号处理后，显 ...

目的与原理 了解各种类型白细胞的形态特征，掌握血涂片制作方法和白细胞分类计数方法，进行不同鱼类白细胞分类计数和血细胞形态特征、变形率等的观察。 白细胞依据其形状、染色颗粒、细胞质和细胞核的形状大小可以进行分类。通常的分类方法是根据细胞浆中有无特殊的嗜色颗粒，将其分成颗粒细胞和无颗粒细胞。颗粒细胞又依据所含颗粒对染色剂反应特性，被区分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；无颗粒细 ...

初生儿：（15～22）×109/L 婴儿：（10～20）×109/L 儿童：（5～12）×109/L 成人：（4～10）×109/L 白细胞分类计数参考值： 中性粒细胞： 儿童：0.3～0.65 成人：0.5～0.7 嗜酸性粒细胞：0.005～0.05 嗜碱性粒细胞：0～0.01 淋巴 ...

实验目的： 掌握细胞计数的方法。 了解区分细胞存活状态的方法。 实验用品： 0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉 普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理： 在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活 ...

一、原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞 ...

由于传统的血球计数板已不能满足高速发展的细胞研究需要，市场上各种自动细胞计数的设备越来越多。常见的主要分为两 类：基于图像的细胞计数仪（Automated vision-based counter）和基于库尔特电阻抗原理的细胞计数仪。 两者主要区别在于，前者扫描仪器视野内图像，依靠设定的上下限细胞大小来进行图像识别，而后者根据细胞通过小孔引起电位变化来计算细胞个数（关于库尔特原理，详见此处）， ...

血细胞计数器（也被拼写血球计数仪）是一种蚀刻玻璃室提出双方将举行石英盖玻片完全室地板0.1毫米以上。为9毫米2的总表面积的计数室中进行蚀刻。 图1、 血细胞计数器的尺寸。 浓度的计算是根据上下方的盖玻片的体积。一个大广场（参见图2中的W）拥有量为0.0001毫升（长x宽x高，也就是说，0.1厘米×0.1厘米×0.01厘米）。 & ...

一、原理 用稀乙酸将血液稀释20倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液中的白细胞数。 二、器材和试剂 1. 器材 生物显微镜、Neubauer氏血细胞计数池、0.02 ml 吸管、小试管、刺血针、2 ml 吸管。 2. 试剂 白细胞稀释液:采用3%乙酸溶液。 三、稀释 ...

一、基本原理： 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应.其优点是方法简便. 特异性高，非特异性荧光染色少.缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体.此法常用于细菌. 病毒等微生物的快速检查和肾炎活检. 皮肤活检的免疫病理检查。 二、试剂与仪器： 1. 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01 mol/L，pH7.4 ...

一、基本原理： 染色程序分为两步，第一步，用未知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30 min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG. IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定未知抗体。 二、试剂与仪器： 1. ...

1、问：做间接法免疫荧光染色，要怎么设置对照？ 参考见解：最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。 （1）空白对照：如果你作的是石蜡切片的免疫组化，这一个对照必须有，目的是看自发荧光。脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。 （2）阴性对照：标本直接滴加二抗，呈阴性反应。 （3）抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性 ...

一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化，不同点如下： 1. 免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同。 2. 免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3. 二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4. 免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （ ...

一、制片 选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙醚等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。 二、固定 除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。 固定的作用有三： 1. 防止标本从玻片上脱落。 2. 除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染 ...

1、荧光显微镜 荧光显微镜是免疫荧光组织化学的基本工具，分透谢和落射二种类型，落射光无需镜内操作，方便、效果更好。它是由超高压光源、滤板系统（包括激发和压制滤板）和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 2、荧光显微镜标本制作要求 （1）载玻片 载玻片厚度应在0.8~1.2 mm之间，太厚的玻片，一方面光吸收多，另一方面不能使激 ...

免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光，下文主要列举了三种细胞免疫荧光染色的实验步骤。 一、zo-1的免疫荧光，步骤如下： 1. 细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出。 2. 用预温的1×PBS洗3次，每次10 ...

1、RPMI-1640 Medium RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。 2、Minimum Essential Medium（MEM） 也 ...