细胞技术

四唑盐（MTT）：噻唑蓝 原理：MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法.活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与活细胞数成正比。 优点：简单快速、灵敏、经济 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响 ...

（一）投稿程序 1、 选择合适的SCI期刊-Choose a journal。结合专业知识、2008或2007年度影响因子表和他人经验来综合选择要投递的期刊，并进入该期刊查询系统查询近年来的文章走向。 2、 下载Introduction for submission。只要到每个杂志的首页，打开submit paper一栏，点击Introduction查看或下载即可。 3、 ...

一、实验试剂 1. PBS（Dulbecco）： 0.10 g/L 无水CaCl2 0.20 g/L KCl 0.20 g/L KHPO4 0.10 g/L MgCl2.6H2O 8.00 g/L NaCl 2.16 g/L NaH2PO4.7H2O 调pH至7.4 2. 生长培养基： 不含谷氨酰胺的RPMI 1640培养基 10% FBS 庆大霉素（可不用）（10 μg/m ...

一、实验原理 将抗C5a单克隆抗体包被固相聚苯乙烯板，加入经聚乙二醇(PEG)处理的待测样本，然后依次加入兔抗人C5a-IgC多克隆抗体和过氧化物酶标记的猪抗兔IsC，再加入底物2，2’-连氮-双(3-乙基苯骈唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)和H2O2显色，于酶标仪405 mn处测定每分钟光密度增加量(OD/min)，以OD/min为纵坐标，C5a标准晶浓度为横坐标绘制标准曲线图，求出 ...

一、贴壁细胞 1. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。 2. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5 ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 3. 去固定液，用PBS或0. ...

一、实验原理 Dynabeads are mixed with the cell sample in a tube. The Dynabeads will bind to the target cells during a short incubation and then the bead-bound cells are separated by a magnet. Positi ...

一、实验试剂 10% (v/v) Household Bleach Callus Induction Medium Gamborg's B5 Basal Medium 0.5 g/liter MES pH 5.7 0.05 mg/liter Kinetin 0.5 mg/liter 24-dichlorophenoxyacetic Acid (24-D) 0.8% (w/v) Agar ...

按现代的观念，凡是混入培养环境中对细胞生存产生有害的成分和造成细胞不纯的异物都应该视为污染。根据这一概念，组织培养污染物应包括生物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质（影响细胞生存、非细胞所需的化学成分）、细胞（非同种的其他细胞）。其中一微生物最为多见。另外，随着使用细胞种类增多，不同细胞交叉污染，尤其是Hela细胞的污染也时有发生，从而造成细胞不纯。 1. 污染途径 ...

1. 原理：细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷） ...

1. 原理：体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 2. 仪器、用品与试剂 （1）仪器与用品：CO2培养箱、普通显微镜、细胞培养血、盖玻片、吸管 （2）试剂 ...

为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键 ...

1. 从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。 （1）胰蛋白酶 (Trypsin) ●在去除不需要的组织后，使用无菌的解 ...

一、 培养细胞的细胞生物学 1. 基本概念通常，体外培养的生物成分无外乎两种结构形式： 其一是小块组织或称为组织块（tissue block），一般称为外植块； 其二是将生物组织分散后制成的单个细胞，一般称为分离的细胞(isolated cell)或者分散的细胞(dissociated cell)。 分散的过程通常在培养液或平衡盐溶液中进行，分散的细胞被悬浮于培养液或平衡盐溶液中。 ...

1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用 ...

花粉粒有可育和不育两种，通过一种可以指示膜的完整性的酶对花粉粒进行染色，由于只有可育的花粉在显微镜下可以观察到荧光，而不育的美誉，因此可以将两者区别。 一、材料和试剂 1. BKbufferS 15 M OPSpH7.5 2. 醋酸荧光素（FDA） 3. Source：拟南芥花粉 4. 取样：开花期 ...

FACS用于研究细胞组分DNA，碘化丙啶（PI）嵌入核酸双链中并可以发荧光。它不能进入活细胞，但是可以进入正在或者已经死亡的细胞。因此PI可以用于免疫荧光染色来鉴定死细胞。DNA染色可以用于研究细胞周期。相对的DNA含量可以坚持G1，G2和S期细胞的比例。在DNA染色中凋亡的细胞有特有的颜色。 一、材料和试剂 1. TritonX-100（SigmaCatalogNo. ...

四甲基偶氮唑盐分析是将四甲基偶氮唑盐还原成甲蜡的颜色，形成紫色，从而来测定活细胞中的酶活性，由于这些试剂能够抑制细胞的活力和生长特性，该方法常用来测量毒性蛋白以及有毒物质。 一、材料和试剂 1. MTT：四甲基偶氮噻唑蓝（Sigma） 2. DPBS缓冲液（Invitrogen） 3. 一般的化学品（Sigma） &n ...

一、材料和仪器 1. 海拉细胞（ATCC#CCL-2） 2. 96孔聚苯乙烯板（Fisher#07-200-91;Corning#3598） 3. MTT细胞增殖试剂盒（ATCC#30-1010K） 4. 胶原I（Sigma-Aldrich#C7661） 5. 密理博（D-MEM）高糖培养基DMEM（Invitrogen#103 ...

内皮细胞分布于整个循环系统，从心脏到最小的毛细血管。在这个步骤中，气管的活力很非常重要。取出器官和开始消化之间的时间越短将提高细胞更有活力的产出及不在含氧量低的条件下太久。小鼠的数量需要：小鼠应该是5~6周大小。年龄大的小鼠内皮细胞的产出会少些。最少5个小鼠可以得到很好的产出。 一、材料和试剂 1. 内皮细胞生长添加剂（ECGS）（Sigma，catalognumber ...

1. 什么是细胞凋亡？ 答：高等真核生物的大多数细胞，在丧失生理功能或严重受损时，激活固有的细胞自杀程序而自灭。这一过程称为细胞程序化死亡。细胞凋亡这个词指细胞程序化死亡所表现的生化和形态变化，其中包括细胞收缩、膜泡化、染色质浓缩和降解成小片段。细胞凋亡中的细胞经常降解成为膜包裹的凋亡体，被巨噬细胞或邻近的细胞吞噬或消化，但不产生炎症反应。McConkey和Orreniu ...