• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        淋巴细胞的分离和激化实验

        互联网

        2636
        一、实验试剂

        1. PBS(Dulbecco):

        0.10 g/L 无水CaCl2

        0.20 g/L KCl

        0.20 g/L KHPO4

        0.10 g/L MgCl2.6H2O

        8.00 g/L NaCl

        2.16 g/L NaH2PO4.7H2O

        调pH至7.4

        2. 生长培养基:

        不含谷氨酰胺的RPMI 1640培养基

        10% FBS

        庆大霉素(可不用)(10 μg/ml)

        2 mmol/L L-谷氨酰胺

        1 mmol/L 丙酮酸钠

        3. 促细胞分裂剂(终浓度)

        5 μg/ml PHA:1 mg/ml母液-20℃分装冻存

        25 μg/ml 刀豆凝集素A(conA):0.4 mg/ml母液-20℃分装冻存

        商陆促分裂原:再水华母液-20℃分装冻存

        二、实验步骤

        1. 收集10 ml全血,加入不含防腐剂的肝素(0.2 ml肝素/10 ml全血)。实验全过程保持无菌操作。

        2. 在15 ml离心管中的肝素化血中加入1 ml 6%葡萄糖,室温放置20~30 min,沉降红细胞。沉降时间不宜过长,否则单核细胞将不再保留在富含白细胞的血浆。

        3. 从葡聚糖处理的血中小心收集红细胞上层的富含白细胞的血浆。

        4. 富含白细胞的血浆室温300 g离心8 min,沉淀细胞。

        5. 弃上清,细胞轻悬于1 ml PBS中。

        6. 于室温下,用无菌巴斯德吸管小心将细胞悬液加在5ml Ficoll-Hypaque之上。此步操作要技术熟练,才能保持血浆曾在Ficoll-Hypaque层之间界面清晰。

        7. 400 g低温(4℃)离心30 min,沉淀细胞。离心后切记不要破坏管中的分层。

        8. 淋巴细胞在血浆和Ficoll-Hypaque层之间的白色浑浊条带中,小心取出贮存,弃红细胞沉淀。

        9. 5 ml PBS洗一次细胞,室温250 g离心5 min,沉淀细胞悬于3~5 ml生长培养基中。

        10. 全部细胞悬液转移至T25组织培养瓶,加促细胞分裂剂。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序