细胞技术

　　1 PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测 　　PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生 可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV，一个钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在膜外侧的PS，再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测（悬浮细胞和贴壁细胞都适用），可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。 　　美国著名生物试剂公司 ...

　　细胞凋亡晚期中，核酸内切酶（某些Caspase的底物）在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下几种方法： 　　1 TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling） 　　通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间 ...

1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml ...

1．按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。2．吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。3．每孔加60μl NAG染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4小时。4．每孔加90μl终止液，混匀后置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长402nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。 ...

一、DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移（ISNT）1．切片常规脱蜡，梯度乙醇复水化。2．将切片组织浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸馏水冲尽。3．0.5％胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗尽。4．用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A，5min。缓冲液A：50mmol/L Tris-HCl 5mmol/L MgCl2 10mmol/ ...

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6．5％正常兔血清封 ...

1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，稀释后直接在显微镜下计数效应细胞和靶细胞的结合率，即平均每100各淋巴细胞中结合了靶细胞的效应细胞的数目。3．其余的 ...

1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。 ...

1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。3．37℃，孵育1～4h。4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准 ...

方法一：1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。4．加0.5ml平衡酚抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/min，离心5min。5．上清移至另一Ep管，加0.5ml氯仿：异戊醇抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/min，离心5mi ...

1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。2．4℃ 500～1000r/min离心弃去染液。3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。4．400目的筛 ...

1．细胞收集：悬浮细胞直接收集10ml的离心管中，而帖壁细胞先用滴管轻轻吹打，调亡细胞一经吹打可能脱壁，收集到10ml的离心管中，没脱壁的细胞用0.02％的EDTA消化使之脱壁，每样本细胞数为（1～5）×106，500～1000r/min离心5min弃去培养液。2．用孵育缓冲液洗1次，500～1000r/min离心5min。3．用100μl的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10～15min。4．5 ...

方法一1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。2．3ml PBS洗一次。3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。6．用1ml PI染液，4℃避光30min。7．流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波 ...

载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。　　质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。质粒有严紧型和 ...

1. 血清必须贮存于–20 ～ -70 oC，若存放于4 oC，请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %，必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。 2. 一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。 3. 瓶装(500ml) ...

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1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。2．1M Tris－HCL Ph=8.0溶液的配置 取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。3. 0.5M EDTA溶液的配置称EDTA－Na2 37.2g 先用140ml ddH2O溶解，加入14ml NaOH（1 ...

1.　标本采集　在无菌条件下于健康产妇分娩后立即取新生儿脐带， 挤出脐带血管中的血液，放入装有含青链霉素的PBS液瓶中，2h之内行脐静脉内皮细胞培养。双抗：青霉素100u/ml; 链霉素100μl/mlPBS：KCl 0.2 g/L KH2PO4 0.24 g/L NaCl 8.0g/L Na2HPO4•7H2O 1.56g/L或Na2HPO4 1.44 g/L。 在800ml蒸馏水中加入上 ...

HyperCLDB: the hypertext on cell culture availability extracted from the Cell Line Data Base of the Interlab ProjectATCC American Type Culture Collection-Cell Biology Collection is the most comprehens ...

1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。 2. 细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。 3. 材料 3.1 37 oC 恒温水槽 3.2 新鲜培养基 3.3 无菌吸管/ 离心管/ 培养瓶 3.4 液氮或干冰容器 4. 步骤： 4.1 操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤 ...