细胞技术

Burnell pBT载体多克隆位点酶切：见附件由于酶切位点离得近，用NotI 和 XhoI 是否能同时进行双酶切，还是需要分部酶切？另外，分别含 NotI和XhoI酶切位点的修饰引物一般需要几个保护碱基？Burnell 期待各位朋友为我答疑解惑，最近实验很郁闷，很悲剧！angler5156 不知道你用的什么公司的酶进行酶切的！这边有个网站是对酶切和保护碱基的设计的！比较有效！你参考下！http://www.neb.com/nebecomm/t ...

zhang201009 哪位高手能指点一下MAPK特异性抑制剂的使用方法？我培养的是海马神经元。:)谢谢谢谢shutaozheng_824 MAPK信号通路通常有3个主要的成员（ERK1/2, JNK1/2和p38），相应的抑制剂为U0126（还有一种PD98059，溶解性较差），SP600125和SB203580三种。使用的方法是先用DMSO先溶解成母液，然后在用无血清的细胞培养液稀释成工作液浓度。由于胎牛血清中还有较多的细 ...

lsdcfhyj 各位前辈，请问测定荧光素酶报告基因的荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒？还有将含荧光素酶报告基因的质粒转染到癌细胞中建立稳定的细胞系，用哪种转染方法好些，建立稳定转染细胞系困难吗？大概几代后转染的基因会丢失？我查看了很多文献，但是不清楚具体的操作步骤及所需用到的仪器，希望做过这方面的前辈能给我指点一下，谢谢阳光海岛 荧光素酶的反应：Luciferin + ATP + ½02 ==(Luciferase)== Oxyluci ...

stillhorse 检测细胞的VEGF表达量，因为是分泌型蛋白，成熟体都分泌在胞外，大部分文献都是取细胞培养液上清做Elisa。如果实验要求不能检测上清液，可否用Elisa检测细胞内部的VEGF表达？胞内胞外的VEGF表达量是平行的，还是相对的？stillhorse 谢谢斑竹！那么是不是内部表达的VEGF高了，就说明细胞分泌在胞外的也高？二者的量是平行的吗？stillhorse 自己顶~~~期待做过胞内VEGF检测的高手 ...

yfsm 最近想买TUNNEL凋亡试剂盒，代理商分别给我推荐了Roche和Promega公司，以前没做过心理没辙，想请各位专家帮忙分析一下，非常感谢！xiaoluks 我想做TNNEL，罗氏的给你报价多少钱啊，楼主想买哪个货号的，如果好的话我也买一样的，呵呵，我也是没做过的，不过当时师姐有用DAB显色法做的，是用的罗氏的试剂盒，质量挺好的，不过我想用荧光的，楼主有什么意见？woxingwosu 我们用Roche，还可以。pro ...

mqjstudent 我现在需要测小鼠血液的胰岛素浓度，试剂盒给的标准样品单位为mIU/ml ,请问该如何换算?freecell 自己google一下 胰岛素换算，结果一堆。怎么这么懒呢，唉。http://blog.163.com/mxzhang81@126/blog/static/30062181200811521029937/limitless 能不能问下lz用的是哪个牌子的试剂盒tienam 园子里有，搜一下吧。本文由丁香园论坛提供， ...

willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法，其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期，和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中，再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合，就能够检测到DNA复制活跃的细胞。但BrdU有一大缺点，就是需要变性DNA后才能与抗体结合，但这就破坏 ...

紫藤树 ΙΚΚε缺乏的小鼠肾小管上皮细胞可以买吗，在哪有?朋友们帮忙找一下，急用！！！！ylhuang0502 在ATCC上试试：atcc.orgfindlg atcc不是很会用啊，百度里面搜不出来吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

cn981 大家好，请问钙的螯合剂BAPTA-AM负载细胞时所用的负载液体是无钙的还是可以有钙的？我的看法：既然BAPTA-AM能螯合钙离子，那么在细胞外也能结合大量的钙离子，如果负载液有钙，BAPTA-AM有一部分会与钙离子结合，然后进入细胞内，这导致了单纯BAPTA-AM浓度的改变，同时也会促使一些被螯合的钙离子借助BAPTA-AM进入细胞，虽然进去以后也是螯合状态。不知道这种看法正确吗？请大家指正。另外，用BAP ...

whl111 P53蛋白具有肿瘤抑制作用，其机制可能是影响肿瘤细胞的凋亡。各位战友有没有想过如果将P53于体外直接作用于肿瘤细胞是不是会引起细胞的凋亡？而如果想办法让P53蛋白在体内能够接触到肿瘤细胞是不是可以起到抑制肿瘤细胞生长的作用呢？pub_wang 不太可能，其通路在肿瘤发生中已被打破，肿瘤中整个平衡都变了。5米 一颗种子当它还是种子的时候，你把种子煮一下也许再也不会发芽，当这颗种子已经长成大树，你在树边浇点热水 ...

游上岸的鱼 敢问各位大侠：平时都是如何追踪有关分子生物学前沿技术？有没有关于分子生物学技术进展的网站？恳请各位大侠介绍下。。感激不尽！！！freecell 多看看顶级杂志。先进的技术都是从那里总结出来的。游上岸的鱼 :)谢谢freecell斑竹本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

david52511 芯片发现一种新蛋白，前期甲基化，功能实验等已验证其是一种抑制肿瘤转移的基因，现在想研究其信号通路，并已通过CO-IP验证了与一条已知通路里的一个蛋白相作用，实验接下来应该如何设计更有意义呢？ylhuang0502 1. 用另一蛋白的siRNA转染细胞后，看你的新蛋白的抑制肿瘤转移的功能是否受影响，另外，看新蛋白的表达（mRNA and protein levels)是否受影响。2。另一蛋白有无抑制剂或激动剂，如有处 ...

papa0210 我检测到细胞内 p-ERK 升高， 同时总的ERK也升高，这能说明ERK被激活了吗？？谢谢大家了papa0210 谢谢大家了fangweibin119 有做内参校正？papa0210 有，用的Tubulinylhuang0502 做densitometry,然后用p-ERK的灰度值除以ERK，即得到p-ERK/ERK的值，然后再对你的对照归一化（normalization),再看是否升高。这个实验涉及统计处理，所以，n至少要3-4 ...

entmao 我做的是喉癌HEP-2细胞培养，要用胰岛素刺激，浓度5微克/ml,不知道临床用的普通胰岛素可不可以用。另外临床用胰岛素都是多少多少单位，不知道1U胰岛素等于多少微克。请各位大侠们指导，多谢啦。ylhuang0502 这个我是外行，但是胰岛素作为一种多肽，LZ要保证它能透过细胞膜，所以一般商用多肽类的抑制剂等试剂用于细胞时，都会连接TAT等信号肽，以保证能透过细胞膜。这一个很重要，希望LZ选用临床用的普通胰岛 ...

xumin19851019 本人最近需要对一批测序克隆进行进化树分析，但是看文献好像有多种不同的进化树构建方式，不知道哪个软件比较合适？我想构建的是细菌的进化树，哪位高人如有能否发我一个啊？xumin101977@163.com 不胜感激！freecell 参考文献啊，有很多的，例如mega。cz8826720 用mega吧，这个软件是最专业的！yuandong 中低端：MEGA(free)http://www.megasoftware ...

olivial 最近在做细胞内信号转导通路PI-3K-Akt，关于它的抑制剂LY 294002的配制，说明书上写用DMSO，在做实验时设了vehicle（含等量DMSO）组，但发现DMSO对细胞（小胶质细胞）有影响，且DMSO与干预药有协同作用，MTT结果显示DMSO浓度=0.1%即对细胞造成损伤，而任何浓度DMSO（0.01%~0.1%）都与干预药有协同作用，乙醇的结果亦如此。所以想请教，大家在配LY时是怎么配的？在使用LY时是 ...

erythrocyte2005 看到分型Ⅰ，Ⅱ，Ⅲpi3k的分型是依据什么？各型有什么差别？ylhuang0502 "The classifications are based on primary structure, regulation, and in vitro lipid substrate specificity."You may check the following website for detailed information.http://en.wikipedia.org/wiki/ ...

韶光逐浅 我想问一下Hoechst凋亡染色试剂盒国产的哪个公司的好啊？yunitongxing 原装进口试剂韶光逐浅 好的，多谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

horizon801 该文是我撰写的一篇综述《后基因组十年志》的部分内容，请园子里战友指正，多提意见，欢迎投票！后基因时代10年间生命科学的发展与所面临的挑战8月2日，我国科学家利用“全基因组关联分析”的方法，在人类1号染色体上发现了肝癌的易感基因区域。这将为肝癌的风险预测、早期预防和个体化治疗提供理论依据。事实上，自2000年人类基因组草图绘制完成迄今，科学家已经相继发现七十余种疾病的易感基因，基于此的基因诊断产业 ...

jldx 是这样，我有一个基因全长的质粒，想研究其中某一个domain，想省点力气不想直接走这个PCR的过程打算单酶切再连接，但并没有合适的酶切位点，有个位点很接近，但是还多余出100多BP，也就是另一个domain的一部分。这样表达出的蛋白，肯定包括目的DOMAIN，不过会不会也包括了另外一部分其它的DOMAIN氨基酸？在功能上和用传统的PCR方法表达出单独表达目的DOMAIN的蛋白会有区别吗？盼解惑，多谢！gi ...