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CYP450酶代谢表型研究(化学抑制法)原理及实验方法

01 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物 ...

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Ⅱ相代谢稳定性研究原理及实验方法

1 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物的 ...

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Ⅰ相代谢稳定性研究原理及实验方法

01 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物 ...

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细胞学堂丨养不好RAW 264.7,是因为忽略了这几点,RAW264.7分化有哪些问题要注意

养过RAW 264.7细胞系的小伙伴,都容易为一个问题感到苦恼:它太容易分化了!到底怎样才能养好它呢?RAW264.7细胞培养注意事项有哪些,今天我们就给大家分享一些心得。RAW264.7细胞培养之基础篇RAW264.7细胞培养的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。 ▲产品详情细胞系:RAW 264.7培养基:CM-0190▲RAW26 ...

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人CD3+T淋巴细胞阳性分选原理及注意事项

人CD3+T淋巴细胞阳性分选原理及注意事项一、细胞分选方法概述细胞学研究中一个很重要的课题就是细胞的分离纯化,尤其是需要对某种特定的细胞进行功能研究,如对细胞培养上清液通过ELISA分析检测细胞因子、细胞共培养检测细胞功能等,都需要得到高纯度的目的细胞。因此,高效地分离所需要的目的细胞是进行细胞功能研究的先决条件。细胞分选(cell sorting)是指根据细胞所具有的特性把某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中 ...

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基于阻抗方法的细胞表型分析技术应用--检测细胞增殖

基本原理:将细胞样本置于CytoView-Z阻抗板中(底部埋入电极的96孔培养板)进行培养,当细胞贴附于电极并伸展开后,将微小的电信号施加于电极上,细胞间形成的联接将阻挡这些电信号的通过,导致阻抗值的读数增加,而细胞结构形态上的细微改变(比如源于受体介导的信号传递或细胞形态学变化)也会影响阻抗值。也就是说,细胞的贴壁、黏附、增殖及形变等过程都会引起阻抗的变化,细胞的增殖数量与阻抗呈现一个正相关的关系。阻抗检测会计 ...

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Nature Methods-让胚胎干细胞茁壮成长,一个神奇的小分子配方介绍

背景介绍 加州理工大学的Kiichi Watanabe在先前的研究中发现,ROCK(Rho-associated Coiled-coil-forming protein serine/threonine Kinase)通路的抑制剂Y-27632能够改善人源胚胎干细胞(hESCs)的生存状态,抑制细胞凋亡。目前,Y-27632已经被广泛运用应用于优化人源干细胞的培养。可惜的是,Y-27632对于细胞活力及生存率提升有限,我们仍然需要找寻更高 ...

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MTT/CCK8/LDH等终点法技术升级方案--基于阻抗方法实时、无标记、长期监测细胞表型

-基于阻抗方法实时、无标记、长期监测细胞表型- Maestro Z基于阻抗检测的细胞分析技术,使得实时、不间断且无需标记的细胞监测成为可能。对数据流的后续分析可以揭示细胞间互作和细胞-药物反应的动力学,可以更好地理解其机理而无需做费时费力的多次终点法实验。(可用于细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路(GPCR/CFTR)、细胞间相互作用 (屏障功能)、病毒学研究及细胞迁移等细胞表型研究。) 细胞表型是涉及基因和蛋 ...

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免疫亲和层析细胞分选的技术原理

​免疫亲和层析法常用于蛋白质等生物大分子的纯化。但你是否想过,一根亲和层析柱子也能用来进行细胞分选,而且还不使用高亲和力抗体?在细胞分选中,我们常常利用免疫识别特性来进行,比如流式分选 (FACS)和免疫磁分选 (MACS)。免疫细胞的划分是依据表面标志 CD 分子,可以被抗体识别。比如针对 CD4 + T 细胞这一特定类群,表面含有 CD45、CD3 和 CD4 标记。而表达 CD4 就是辅助性 T 细胞的特征。由此而来,免疫磁分选利用特定抗体偶联磁珠来捕获细胞。细胞与磁珠 ...

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多重磁珠阳选方法

1.分选原理源自德国 IBALifesciences 的多重磁珠阳选,选后细胞无试剂残留(即 label-free)的特性,非常适用于分选一些需要用多种 marker 才能准确鉴定的细胞,如 Tcm,Tn,Treg 细胞。假如现在我们想用 CD8+CD62L+CD45RA- 这几个 marker来分选 Tcm 细胞,首先我们可以通过磁珠法阳选先得到 CD8+的细胞,将分选得到的细胞上结合的磁珠等分选试剂去除后,再分选出 CD62L+ 的细胞,这样获得到CD62L+CD8 + 的高纯度 T 细 ...

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MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞

​通过 TCR 与 MHC 多肽复合物间的特异性识别作用,可以对抗原特异性 T 细胞进行检测和分离。然而,当 MHC 多肽复合物为单体状态时,其与 T 细胞的结合并不稳定。若将其四聚体化后,其与 TCR 的结合可保持在一个稳定的状态,成为检测的工具。德国 IBA Lifesciences 研发的 MHC I STREPTAMERS®技术,利用了这一特点,将传统的链霉亲和素改进为 Strep-Tactin®,搭配荧光标记或纳米磁珠,与多聚化的低亲和力MHC I-Streps 形成复合体,实现了对抗 ...

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这种阴选方法快速简单,10 分钟得到想要的活性细胞!

一起看 NK 细胞分选方案与数据~在细胞分选中,阴选通常是指对非目的细胞进行标记和去除,来得到目的细胞。避免通过直接的标记目的细胞(比如使用表面特异性抗体标记),从而来减少细胞活化可能。因此,阴选方法的优势在于可以保持目的细胞未受刺激的原始状态,分选速度快。不过相对阳选而言纯度稍低,而且需要事先对原始样品的细胞组分有所了解,准备相应的标记抗体。阴选的优势与劣势本文将大家分享一种新的阴选方法和相关数据,利用 Strep-Tac ...

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单细胞组学研究新方法——活细胞单细胞测序技术

单细胞测序在疾病诊断和细胞异质性研究中发挥着重要作用。然而目前的单细胞测序手段需要将细胞消化并裂解才能够进行,而细胞状态在这一操作中不可避免的会发生改变,因此很难掌握细胞真实的基因表达情况,尤其对于基因通路上表达变化的检测极为不利。近期苏伊士理工大学使用FluidFM创建了一种原位活细胞基因测序方法,这种方法能够在不杀死细胞的情况下完成对细胞的测序工作。通过这种技术该团队成功完成单细胞RNA基因测序,并通 ...

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Nature Methods-让胚胎干细胞茁壮成长,一个神奇的小分子配方介绍

​ 在科学的海洋里,阻碍科研工作者们前进的往往不是他们天马星空的想象力,而是严苛的实验条件。 诱导多功能干细胞(iPSC)可以无限的迭代更新并分化为所有细胞类型。iPSC为新药的发现、疾病建模和细胞疗法开创了全新的思路。人源多功能干细胞(hPSCs)对体外的环境扰动及其敏感,存活率及单细胞克隆效率较低。这一问题严重制约了对hPSC的广泛研究和使用。图片来源:siimland.com加州理工大学的Kiichi Watanab ...

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每天在用的完全培养基,你了解多少?

“完全培养基” 指的是已经添加了各种添加物、含有培养基的所有成分、能够满足某种特定细胞生长所需的培养基。通常是使用限定成分的培养基来配置,一些不稳定的成分——如谷氨酰胺以及各种补充物、血清、生长因子或激素,都在临用前加入。限定成分的培养基品种繁多,从简单的仅含有必需氨基酸、维生素、无机盐的 Eagle's MEM,到复杂的 M199、F12 等,这些都可被用作一种基础培养基,添加各种不同的特殊物质,以满足许多不同类型细胞的需求。氨基酸氨 ...

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Ficoll密度梯度离心法提取PBMC原理及注意事项

Ficoll密度梯度离心法提取PBMC原理及注意事项外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。PBMC 可利用健康人或动物供体的外周血,通过 Ficoll 密度梯度离心,磁珠分选等步骤获得,主要包括淋巴细胞和单核细胞。Ficoll 是蔗糖的多聚体,中性,平均分 ...

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为什么要使用原代肝细胞?

原代肝细胞肝脏,是脊椎动物体内以代谢功能为主的器官,也是人的五脏之一。肝脏能促使一些有毒物质的改进,再排泄体外,从而起到解毒作用。它是人体内的一座 “化工厂”,是新陈代谢的重要器官。但同时,肝脏也十分脆弱,过度的酒精、药物带来的毒性也会对其造成不可逆的损伤。因此无论在疾病研究、药物研发,或是环境安全等的研究中,对肝脏进行研究都至关重要。在这些研究中使用原代肝细胞,往往是最佳的选择。因为原代细胞离体时间短,保持了其在体内的 ...

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肿瘤免疫治疗概述及分类

肿瘤免疫治疗就是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环,恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应,从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等。近几年,肿瘤免疫治疗的好消息不断,目前已在多种肿瘤如黑色素瘤,非小细胞肺癌、肾癌和前列腺癌等实体瘤的治疗中展示出了强大的抗肿瘤活性,多个肿瘤免疫治疗药物已经获得美国FDA批准临床应用。肿瘤免疫治疗是通过主动或被动方式使 ...

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有效性超90%的新冠疫苗,“低温”是关键

目前获得FDA紧急使用授权的mRNA核酸疫苗A,需要-70摄氏度的温度条件下保存; 这些超低温储存的疫苗在装有干冰的容器中从制造商那里运出,配送中转中心或疫苗接种点应在收到疫苗后24小时内重新包装干冰,并每5天重新包装一次,以保持所需的温度。如果疫苗放在2到8摄氏度的冰箱中保存,须在5天(120小时)内使用。

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常见的T细胞是αβ T细胞,那γδ T细胞又是什么细胞?

近日,Adicet Bio Inc. 宣布FDA已批准其ADI-001的IND申请,这是一种针对CD20的嵌合抗原受体(CAR)的异体γδ(gamma/delta)T细胞疗法,用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在肿瘤免疫细胞疗法中,我们最熟悉的是CAR-T,以及时下火热的CAR-NK和CAR-M疗法。小编在前几期的细胞疗法系列微信中,已经给大家介绍了CAR-M和CAR-NK的相关内容(点击橘色字体查看)。这一期,我们就来聊一聊这一“小众 ...

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