细胞技术

immyself 有那种干了之后会把盖玻片牢牢粘著的吗？现在用的封片剂是液态的，老是滑来滑去谢谢！hongfunv1984 我最近也在做细胞免疫荧光，也是发现这个问题。后来发现是防淬灭剂加的太多了，现在在做实验室就没有这种情况了。。你可以稍加一点就行了。用1undefined10的盖玻片封片。photomedicine 是的，防淬灭剂不能加太多，否则会滑来滑去，加1-2滴其实就够了。然后加上盖玻片，再在盖玻片周边用指甲油封装，指甲油很容易挥 ...

love925929 有哪位大虾知道BMP/Smad信号通路的化学抑制剂？急等，谢谢！徐旖旎 楼主，你得到答案了吗？能否共享一下？坚持不懈ing 你好，我现在也需要做点，你找到了吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

一光年 最近要做生殖的细胞方面的实验，前期一直用在垂体细胞原代培养，但是一直困扰没有促性腺激素细胞系，但是在网络中搜索，发现老外的文章中经常提到αT3-1，LβT2 或LβT4细胞系，在ATCC等知名的细胞库也未发现这些细胞系，不知道各位高手指点在哪里可以找到这几种细胞系？不甚感激！！veimojie 我一直也在做这方面的研究 什么地方能有啊 ？banana_smile 我也想做这方面的研究，恳请知道的大虾告之beastjane “一光年 ...

华丽转身然后悲伤 我很想知道caspase3 的前体pro-caspase3 在细胞中的存在情况，希望大家帮帮忙zhangy1027 Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cys ...

淡叶云梦 我们前人做的质粒转染 是3.0 荧光显微镜照相 能拍出绿色荧光 但有人说3.0是找不出来的 3.1才行 请问什么是正确答案biolinkphilic 应该要带有表达荧光蛋白GFP的基因才可以吧，跟3.0和3.1有什么关系呢？求战友不吝赐教woxingwosu PCDNA3.0 和3.1都是没有荧光的，除非是克隆的时候自己加上的GFP,否则看到的荧光可能是背景。如果把显微镜的exposure时间调得很长，细胞都会看到荧光。artneer 建议使用 ...

viola2010 您好，我是新手，阅读文献时看到 TOPFLASH and FOPFLASH reporter vectors？不明白是什么？All transfections included the renilla luciferase expression vector, pRL-SV40 as a control for sample-to-sample variation in transfection.怎末理解？在顺转过程中，如何观察转染效率？zhujoker 使用GFP做转染效率对照 ...

chenqiuling 我现在在做一个关于AP-1通路的动物实验，想问各位老鼠谁在动物身上用过SP600125，SP600125活体用药要怎么配制，文献上有提到用DMSO溶，具体要配成什么样一个浓度？xiemengxipan 请问楼主，你的实验开始了没，我也是在动物身上用SP-600125，也不知道你所问的，我想问下，你的SP-600125买了没？有多不，可以共享不，我在湖南长沙！chenqiuling 我的实验现在开始了，你 ...

吴佰霖 miR-542-5p.h在miRBse查不到，只查到miR-542的3p和5p，h好像在miRBase的命名规则中也看不到，请教高手了baby_susan miR-542-5p.h，这个名称你从哪得到的呢，是不是本身就存在错误呢，我也是从来没见过这个写法，也认为不应该有这个命名方法biolinkphilic 一定要有原文才能进行判断zhujoker h可能代表的是人吧，但是更应该在前面，问问题前自己多查查看看，不要问不负责 ...

gggchilly 如何进行BLAST的本地化,除了比对询问的序列与网站序列之外,怎么样才能比对自己的二条序列或多条序列?不胜感激,网上搜索的全部都是不太详细的大致的内容. 我是电脑菜鸟,急求.最好是和NCBI的官方网站一样的用户界面. 不要在DOS下操作,太难了.或 妹儿 gggchilly @ yahoo.com.cn3ks.dnazyme 基因库恐怕无法本地化，BLAST就无法本地化。adon bioedit 软件可以blast本地化，从ncbi ...

xinlongrui 哪位大侠在用磷酸钙转染293T，小妹有问题请教。版主woxingwosu留言:有什么具体问题可以提出来，会的人自然就回答了。另外，可以到技术区去问，响应的人可能更更多devil19840 曾经做过一段时间，最终放弃，感觉磷酸钙转染还是比较烦心。最大的问题是磷酸钙转染的试剂不能长期保存，使用了几个月之后就要更换，重新配制，而且要求试剂的精度很高，实验室要有很灵敏准确的ph计。xinlongrui 要转染 ...

樊小乖 请教各位高手，我要用质粒转染人支气管上皮细胞，用哪个试剂盒比较好，请指点一下zhujoker 不知道你是使用得细胞株还是原代的，不同情况不同处理樊小乖 是传代细胞本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wrwy 因实验急需MCF7,SKBR3乳腺癌细胞，哪位好心人能交换，本实验有T47D,231.293等细胞。谢谢。msniu 我有MCF-7，站内联系chenrongjun2011 本人在广州做实验，需要用到SKBR3，能否相赠一点，请加QQ1765730072或电话15915836004本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcom ...

yuanyuan_626 想问一下我想研究一种细胞的过度凋亡是不是与AKT/PKB 下调有关，那我检测一下AKT 的 mRNA，及AKT ，P-AKT 的表达量，这样的思路有没有问题？我是一只小菜鸟，还没开始做实验，最近看这方面的文献看的脑袋混乱了旁观者清，请大家帮我分析一下有没有可行性小妹在此谢过了yuanyuan_626 这个想法行不通吗？求指教rarazhuzhu 谈谈我的看法楼主想要验证细胞凋亡途径中是否有Akt/PKB参与首先要确 ...

cgaoy121 请问PKA抑制剂H89用什么溶剂来溶解，DMSO，水，培养基还是PBS？cgaoy121 找到了，用DMSO鱼cynthia DMSO溶解后 用什么稀释 PBS么cgaoy121 PBS或者培养基都可以稀释chenlinghezzx 一般是用培养基。萍萍-2011 用培养基稀释本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

freezingfall 大家好，我最近做的Pretro-HIG-XX以及对照Pretro-HIG的转染胃癌细胞系SGC7901，用的是lipofectamine2000试剂，六孔板按照protocol步骤转染，连续三次转染之后对照组的细胞均死亡，换HD试剂转染后不存在这种情况，可排除质粒问题，请问各位战友，究竟是什么原因导致如此现象，困惑中~~~~~~~~~~~~zhujoker 自己注意一下你的转染试剂是不是假的，我估计这个 ...

3200 本人最近需要使用到PDTC做一批大鼠实验，由于新手上路，请请教各位战友，PDTC该使用何种液体配制（有人说用水不易溶解），配制后采用何种方法灭菌（是否耐高温）？如何保存？不胜感激！！叩谢3200 再次叩谢各位战友，比较急哈，可以直接讲解，也可电邮luohan_32008462@163.com.谢谢，谢谢！haodanzhang 配制：一般用双蒸水溶解，不好溶解的话可以加点DMSO，然后用双蒸水稀释至相应浓度。灭菌：可以用0. ...

sn党参 请问我将细胞离心后加入细胞裂解液后变得黏黏的，能拉出丝是怎么回事呢，细胞是K562/a.，裂解液是tris，SDS（0.4g),定容至100ml，用时加酶抑制剂sn党参 此外请问我要研究的是细胞膜蛋白，请问需要离心吗，有说法说离心后膜蛋白是在沉淀里面的，请问离心是为了去除核酸吗，如果不去除，会有什么影响，谢谢xhjggl 黏黏的是完整基因组的缘故，可以超声或匀浆，提取膜蛋白，可以用以下产品本文由丁香园论坛提供，想了解更 ...

viola2010 您好，我是新手，我想在细胞中导入wnt1基因，希望基因导入后能够稳定表达，在参考文献上看到HA-tagged Wnt1 expression vector (pHA-Wnt1），是如何构建的？怎样转染进入细胞？其中PHA其中是什么？质粒吗？还是。。。chenhaombb PHA是质粒。先得到目的基因，再连接到载体上，转染即可woxingwosu 更确切的说，pHA应该是一个带有HA的标签（tag）的载体（可能是作者自己构建的）， ...

fengtingting2010 小鼠T细胞中beta-Actin的含量是多少啊，我要算小鼠T细胞中Foxp3的含量，如何知道呢？还有Western blot的抗体最适的稀释度如何确定，是全部做完后，拍片才能确定吗？一般加的抗体的体积是固定的吗？是10ul吗？fengtingting2010 如果上样量是20ug，体积是10ul。一抗和二抗的稀释度和体积如何确定呢？如何知道目的蛋白的丰度？万一目的蛋白的量仅在ng级别怎么办 ...

vera21173 我研究的是一个基因对肿瘤细胞增殖的影响，上调这个基因的表达可以促进细胞增殖（CCK-8和平板集落形成实验的结果一致），下调这个基因的表达可以抑制细胞增殖。但有平板集落形成实验有一个奇怪的现象，稳转这个基因的细胞集落形成数量明显比空载细胞多，但集落大小比空载细胞小很多，镜下观察发现空载细胞形成的集落中的细胞很分散，而稳转目的基因的细胞集落中细胞很紧密。请问这能说明什么问题？zhouyongchu ...