蛋白质技术

相关专题 一、原理1、 E . coli 表达系统E . coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-Page 以检测表达蛋白质。2、 外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减 ...

相关专题 一、实验目的1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理；2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。二、实验原理有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀，其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80，82％的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷 ...

相关专题 一、目的种子蛋白质由10％-15％的原生质蛋白质（复合蛋白质）和85％-90%的贮藏蛋白质（简单蛋白质）组成。Osbome 在种子中发现与分离出来清蛋白、球蛋白、谷蛋白及醇溶蛋白等4 个组分。不同作物种子中各蛋白组分比例有很大差异，不同蛋白组分的必需氨基酸含量也不相同，通常醇溶蛋白中缺乏Lys、Trp、Met 及Ile 等必需氨基酸 ...

相关专题 一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的 ...

相关专题 SPA提取的方法很多，包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下：1．煮沸提取法⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上，37℃培养20h~24h。⑵ 以0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下，配成10%(V/V)的悬液。⑶ 水浴中煮沸1h，迅速冷却至4℃，4 000r/min离心 ...

相关专题 在酶标记的溶液中，出现的是各种交联物的混合物有酶－抗体、酶－抗体－酶、抗体－抗体、酶－酶，甚至还有游离的酶和抗体。在这中间除了抗体－酶和酶－抗体－酶外其它都应该给予除去。1．50%饱和硫酸铵沉淀法。 此法只能除去游离的酶及酶－酶聚合体。而不能除去其它不需要者。但是此法对酶标抗体的损耗少。2．过SephadexG200或Sepharo ...

相关专题 1．DEAE－Sephadex A－25离子交换层析法⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液平衡DEAE－Sephadex A－25柱。⑵ 加样后，用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱12h~14h。⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱，流速0.15ml~0.2ml/min，收集流出液，测OD275nm。 ...

相关专题 免疫球蛋白的轻链可分为Kappa型和Lambda型。每一轻链上的型别只能属于两型别中的某一型别而不能两者兼而有之亦即属于Kappa型或是Lambda型，而不能有Kappa-Lambda型者。Kappa型和Lambda型的不 同主要表现在氨基酸序列和二硫 链位置的不同。但是，不同种属的 Kappa型或Lambda型之间有较大的相似性 ...

相关专题 （一）材料 1．血清 2．葡聚糖凝胶G200 3．洗脱液0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl或0.1Mol/L pH8.0 Tris－HCl+0.14Mol/L NaCl）。 （二） 操作方法 选取2.50cm×90cm层析柱，用葡聚糖凝胶G200装柱，平衡后，直接加血清样品10ml或硫酸铵粗提制品， ...

相关专题 （一）试剂及配制 1．饱和硫酸铵液 2．各种磷酸盐缓冲液 ⑴ 0.2mol/L原液 A液：0.20Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·H2O 31.20g H2O 1 000ml B液：0.20Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 71.7g H2O 1 000ml ⑵ 0.10Mol/L pH8.0P ...

相关专题 （一）材料与试剂配制 1．禽胆汁 2．饱和硫酸铵溶液 3．0.01Mol/L pH7.4PBS液 4．0.10Mol/L pH6.4PBS液（0.30Mol/L NaCl） 5． DEAE52-纤维素 （二）操作方法 1．取冷藏的胆汁3Ⅹml，缓慢滴加Ⅹml饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使成25％饱和硫酸铵液。4℃放置30min。 1 ...

相关专题 （一）材料与试剂 1．初乳 2．SephadexG200 3．0.10Mol/L pH6.8PB液 4．0.01Mol/L pH7.4PB液 5．DEAE52 （二）操作方法 1．取初乳20ml，10 000rpm离心10min，弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。 2．取乳清过SephadexG200柱（柱规格为2.50cm×90cm） ...

相关专题 （一）材料与试剂配制 1．DEAE52纤维素 2．0.10Mol/L ZnSO4液 ZnSO4·7H2O 2.88g 加水至1 000.00ml 3．饱和硫酸铵溶液 4．10％EDTA—Na 5．SephadexG200 6．0.01Mol/L pH7.4PB液 7．0.10Mol/L pH6.4PB液 8．血清 ...

相关专题 蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。 （一）透析袋浓缩法 利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液， ...

相关专题 （一）材料与试剂 1．血清 2．饱和硫酸铵溶液 3．洗脱液0.005Mol/L pH7.4PB液 0.025 Mol/L pH7.4PB液 0.01Mol/L pH7.4PBS液(0.14mol/L NaCl) 4．DE52 5．SephadexG150 （二）操作方法 1．取血清倍比稀释后，加等量饱和（NH4）2SO4溶液，盐析 ...

相关专题 (一) 原理 将SPA偶联至Sepharose－4B上后，利用亲和层析来提取人和某些动物的IgG，这样可以省去制备第二抗体。该法特别适用于单克隆抗体的研究。该法提取IgG与利用IgG纯化SPA原理是一致的。 (二) 材料与试剂 1．Sepharose－4B琼脂糖 2．SPA 3．溴化氰 4．0.10Mol/L NaHCO3液 5． ...

相关专题 （一） SPA的提取 SPA提取的方法很多，包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下： 1．煮沸提取法 ⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上，37℃培养20h~24h。 ⑵ 以0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下，配成10%(V/V)的悬液。 ⑶ 水浴中煮沸1h，迅速冷 ...

相关专题 一、简介：1 细胞质膜资料1895年Overton从研究细胞透性得出"细胞膜由连续的脂类物质组成"。1925年 Gorter&Grendel:用脂单分子膜技术测定细胞膜中脂分子的总面积，提出："细胞膜是由双层脂分子组成"。1935年 Danielli&Davson：从测定膜的表面张力得出细胞膜的"三明治结构模型"，即蛋白质－脂-蛋白 ...

相关专题 1 分离方法 　　采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等 ...

相关专题 生物细胞产生的酶有两类：一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶，称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶，如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶，就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高，容易得到；另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细胞内酶，如柠檬酸、肌苷酸、味精的发酵生产所进行的一系列化学反应 ...