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        免疫球蛋白提取:连续提取免疫球蛋白

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        (一)试剂及配制
        1.饱和硫酸铵液
        2.各种磷酸盐缓冲液
        ⑴ 0.2mol/L原液
        A液:0.20Mol/L NaH2PO4液
        NaH2PO4·H2O 31.20g
        H2O 1 000ml
        B液:0.20Mol/L Na2HPO4液
        Na2HPO4·12H2O 71.7g
        H2O 1 000ml
        ⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB液
        A液: 53ml
        B液: 947ml
        H2O 加至 2 000ml
        ⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB液
        取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml,加H2O至2 000ml
        ⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB液
        取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml,加水至2 000ml。
        ⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液
        取0.10.1 Mol/L pH8.0 PB液700ml,加水至2 000ml。
        ⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB液
        A: 920ml
        B: 80ml
        H2O 加至 2 000ml
        ⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB液
        a液.0.40Mol/L NaH2PO4液
        NaH2PO4·2H2O 62.40g
        H2O 加至 1 000ml
        B液.0.40Mol/L Na2HPO4液
        Na2HPO4·12H2O 143.4g
        H2O 加至 1 000ml
        取a液 960ml
        b液 40ml
        混合即可。
        ⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS
        取0.10Mol/L pH8.0 PB液 100ml
        NaCl 8.20g
        H2O 加至 1 000ml
        3.DEAE-纤维素(细粒级)
        4.SephadexG200
        (二)操作方法
        1.取一定量的血清,加等量的生理盐水,然后逐渐滴加饱和硫酸铵溶液,使成40%的饱和度,静置30min。
        2.10 000r/min离心10min,去上清。
        3.加入一定量的生理盐水,使沉淀溶解,再加入饱和硫酸铵溶液,使成40%饱和度。10 000r/min离心10min,去上清。
        4.再重复步骤3一次。
        5.将沉淀以少量生理盐水溶解,透析,除盐浓缩。
        6.制备DEAE-纤维素柱,以0.005Mol/L pH8.0PB液平衡。
        同时制备SephadexG200凝胶柱,以0.01Mol/L pH8.0PBS液平衡并进行洗脱。
        7.以0.005Mol/L pH8.0PB液洗脱,得蛋白液为IgG。
        7. 以0.025 Mol/L pH8.0PB液洗脱,得蛋白主要是IgE,再过SephadexG200凝胶柱,收集第一峰即为纯IgE。
        8. 以0.035 Mol/L pH8.0PB液洗脱,得蛋白主要是IgA,再过SephadexG200凝胶柱,收集第一峰即为纯IgA。
        10.以0.10Mol/L pH5.8PB液洗脱,洗脱液主要有IgM、IgG及白蛋白的混杂物。
        11.以0.40Mol/L pH5.2PB液洗脱,得蛋白液主要是IgM。过SephadexG200,收集第二峰即为纯IgM。
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