蛋白质技术

拉曼光谱技术是一种非接触，无损的快速检测技术，能方便地给出物质的结构、组分等指纹信息，并且能从分子层面上识别各类物质及晶型结构，非常适合用于制药过程及药品检测。 虽然红外吸收光谱技术已经广泛地应用于制药行业，但其具有一定的局限性。与红外吸收光谱相比，拉曼光谱具有如下明显的技术优势： 光谱分辨率更高，能给出更多的光谱细节，信息更加丰富； 拉曼测试简单，不需要制样。红外需要制样，对于某 ...

蛋白质是生命活动的执行者，细胞内的生理变化都是通过蛋白质来实现的。但是生命活动中各项功能和行为不是由单一的蛋白质来完成的，需要蛋白质与蛋白质，蛋白质与核酸之间的相互作用来实现的。蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。于是对于蛋白之间相互作用的研究也变的很重要，关于研究方法也是层出不穷。 在我们实验研究的过程中主要用到以下几种技术： 1.酵母双杂交（Y2H） ...

条条大路通罗马，纯化之路千万条。本篇是写给蛋白质纯化新手的，就一些最常用的纯化工艺、概念方法作一些列举。以起始原料的不同来进行分类，分为：大肠杆菌、酵母、细胞培养、腹水、血清、生物组织六个板块。 板块一、大肠杆菌 （这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分泌到培养基中的工程菌我没有见过。） 一、关于菌体的量 大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的 ...

摘自张迺衡编著的（北京医科大学，第二版) 1. 用紫外吸收法测定溶液中蛋白质含量时，波长是多少？用此波长的依据是什么？ 色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸在280nm附近有最大吸收，多数蛋白含有这tyr， trp残基。所以在紫外分光中用280nm对它们进行检测。 2. 氨基酸有哪些成色反应？哪些是肽，蛋白质共有的？各 ...

先介绍一下His Tag，为5-15 His 串在一起的小肽， 在表达纯化中用的较为普遍的一种Tag 从本质上说它是一种亲和性Tag，但也个案证明其也能做一些兼职工作：增加蛋白可溶性，提高蛋白稳定性。但它的本质工作是与IMAC亲和，使纯化过程变的更加程序化，更具可控性。 相对与其他亲和Tag如 GST Flag Strep 它的特点可谓鲜明： 一，小，浓缩的都是精华， ...

Glutathione S-transferase omega 1 (GSTO-1) exists as both a wild-type (wt) and a mutant (mut) enzyme due to a polymorphism in a single amino acid Ala140Asp. (1) The role that this gene product plays ...

pET 是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。经pET系统过与使用过和正在使用这个系统的科学家的交流，我们发现了一些在使用pET系统的过程中以及原核表达中的一些常见问题。在此，我们选取了其中一些比较有代表性的问题，附上我们的建议改进方案，并期待和你一起分享成功的喜悦。 1.目的蛋白总是以不可溶的形式出现真是令人烦恼 在大肠杆菌中表达 ...

INTRODUCTION Serum paraoxonase-1 (PON-1) is a high-density lipoprotein (HDL)-associated calcium-dependant esterase with antioxidant and anti-atherogenic properties. The activity of paraoxonase-1 has ...

一、实验试剂 采用T7 Tag Affinity Purification Kit T7 Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29 mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137 mM NaCl，1%吐温-20，pH7.3 洗脱缓冲液: 0.1 M柠檬酸，pH2.2 中和缓冲液：2 M Tris，pH10.4。 PEG 20 000。 二、实验 ...

蛋白在蔗糖梯度中的沉降率可以用于与已经知道的S值与其在同梯度中蛋白相比来确定其S值。从而可用于计算蛋白的大约的分子量，也可用于鉴定两个蛋白的相互作用，如果他们在相同梯度出峰。 一、材料和试剂 1. 蔗糖（SigmaCatalog No.S0389） 2. 明胶（SigmaCatalog No.G9136） 二、仪器 1.离心机（B ...

一、材料与方法 1. EDTA（无蛋白酶抑制剂）（Roche） 2. 毛地黄皂苷（EMDChemicals） 3. 蛋白酶抑制剂（DMSO，leupeptin，pepstatin）（Sigma） 4. BECKMAN离心管（BECKMAN） 5. ANTI-FlagM2亲和树脂（S ...

一、材料与方法 1. EDTA（无蛋白酶抑制剂）（Roche） 2. 酸冲洗过的425-600玻璃珠（Sigma） 3. 洋地黄皂苷（digitonin）（EMDChemicals） 4. 蛋白酶抑制剂（DMSO亮肽素胃蛋白酶抑制剂）（Sigma） 5. BECKMAN1.5 ml ...

1. 在western实验中，通常有人采用TBS，有人采用PBS，在使用中有什么区别？ 选择合适的缓冲液对于维持一定PH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性是很重要的。PBS的缓冲能力强于TBS（因为混合缓冲液在一定的离子强度下常常具有更宽的缓冲范围），TBS在pH7.0以下缓冲能力较弱（不过PBS易污染）。但我们常常要根据我们实验目的选用合适的缓冲液，如在蛋白纯化中进行阴离子交换层析 ...

1. 凝胶肿胀或卷曲： 注意转膜之前，切割下来的凝胶一定要在转膜缓冲液中浸泡平衡5-10分钟，要含有20%的甲醇。 2. 条带歪斜、或漂移 因为转膜仪使用时间太长，两块板之间的海绵由于长期使用变得很薄。当按照阴极-海棉-滤纸-胶-膜-滤纸-海绵依次放好后两块板不能压紧，因而在胶和膜之间可能存在潜在的间隙，电转移时蛋白从胶和膜之间的空隙中流走，形成如图所示的形状。使用十几张 ...

一、注意事项： 1. 清洗厚薄两块玻片：初次使用需要用酒精棉球擦拭干净。经常使用用自来水冲洗干净后，再用单蒸水冲洗，晾干。也可用酒精擦拭。 2. 取合适大小，容器将各液体依次加入，在加AP和TEMED前将玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich，放在水平桌面上锁定后，固定在casting stand上，注意垂直放置，压紧底面的胶条 ...

1. 安装：（1）先找到图一所示的图标，双击安装。 图一 （2）系统重启后桌面出现图二所示的图标 图二 2. 激活：在文件夹找到图三 图三 （1）双击后出现图四所示的对话框 图四 （2）点击Apply patch后，打开桌面Quantity One图标，激活完成。 3. 应用： （1）首先，随便打开一个Western blot结果图片（注意：图片格式为T ...

1. 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。 2. 加一抗后最好4℃过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4℃也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温1小时即可。 3. 磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的 ...

材料与试剂 1. 99.5%乙醇 2. 100%乙酸 3. 亚硫酸氢钠 4. 硝酸银 5. 甲醛溶液（37%） 6. 碳酸钠 7. 硫代硫酸钠 ...

原理 通常，我们可以利用烟草的瞬时表达系统来观察感兴趣蛋白的亚细胞定位（通过与绿色荧光蛋白构成融合蛋白）。同时，还可以检测蛋白的表达量。这一个过程是通过农杆菌作为一个工具将目的基因整合到到烟草的细胞内的。 材料与试剂 1. 携带表达载体的农杆菌菌株（通常表达载体由35S启动子驱动） 2. 2-4周的烟草植株 3. LB培养基 4. ...

原理 BCR蛋白分析是一种对样品中总蛋白进行量化的分析方法，原理是在碱性溶液中蛋白质可以将Cu2+还原成Cu1+（双缩脲反应），从而出现明显的紫色，铜离子被还原主要是蛋白质分子中半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸，色氨酸四种氨基酸的作用，然而，与Coomassie燃料结合反应不同的是，一般的多肽键都能形成颜色，从而减少了由于蛋白质不同的变异性。 与Bradford分析实验相比较，BCA实验分析更加客观 ...