His Tag的功与过
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先介绍一下His Tag，为5-15 His 串在一起的小肽， 在表达纯化中用的较为普遍的一种Tag, 从本质上说它是一种亲和性Tag，但也个案证明其也能做一些兼职工作：增加蛋白可溶性，提高蛋白稳定性。但它的本质工作是与IMAC亲和，使纯化过程变的更加程序化，更具可控性。
相对与其他亲和Tag,如 GST, Flag, Strep, 它的特点可谓鲜明：
一，小，浓缩的都是精华，6个His 放在一起约2.5KD大小。His 的等电点为7.6，在常用的纯化缓冲体系（pH 8.0）中几乎不带电荷。所以这么小的Tag对passenger蛋白本身性质的影响是非常小的。
二，廉， 纯化带His Tag蛋白的成本相对于其他Tag来说，是最便宜的。对His Tag来说, 每克填料约10刀，配1 L 洗脱缓冲液约7元; 而GST Tag，每克填料9刀，配1 L 洗脱缓冲液约70元; 对于 StrepII, 每克填料约20刀，配1 L 洗脱缓冲液约700元。其他的标签就不说了，因为填料的价格就不在一个数量级呀，要贵的多。从使用成本上来说，His Tag 的优势再明显不过了。
His Tag这两个优点使它一直占据Tag家族老大的位置，可谓家喻户晓。但是千万别被这些光环恍了您的眼睛。它并不是完美无瑕的：
一，最常见的就是加了His Tag后，不挂柱。通常解释为Tag 无游离性，折叠到蛋白内部了。解决办法就是在蛋白N/C两端分别加上Tag，或者使用其他Tag，另外就是将蛋白变性后上柱。
二，对于一些容易被氧化的蛋白，个人建议最好别用His Tag。这些蛋白在纯化过程中，要加入还原剂防止蛋白被氧化，IMAC是比较忌讳这些还原剂的，当然你可以选用tris-(2-carboxylethyl)-phosphine(TCEP)作为还原剂，因为它不还原金属离子，但成本太高了。这些容易被氧化的蛋白，特别是一些激酶，在加了His Tag 后，会在纯化过程中，显得很不安分，经常会形成沉淀，不容易被浓缩。遇到这些让人头疼的问题该怎么办？要么放弃亲和纯化方法，选用离子层析等其他纯化方法；要么放弃His Tag，选用其他Tag。
Tag 非圣贤，孰能无过。只要充分了解His Tag 的优缺点，才能充分利用其，是纯化简单可控！
