蛋白质技术

ahuchxq 最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验！谢谢！fangweibin119 ahuchxq wrote:最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验 ...

ahuchxq 因为最近作磷酸化的ERK的western ,我用的是Hela 229 细胞，但是比较郁闷的是，这个细胞为什么阳性对照组和没有任何处理的一组都有磷酸化的ERK？是我细胞坏了还是本来这个细胞就是这样？我用Hela 细胞试了下，对照组也有一点，但是明显比阳性对照组弱，293细胞也是。但是就是229细胞没有任何区别，我很郁闷，试了好几次都是这样，因为前期大量实验都是在229细胞上做的，所以不能选其他细胞了。。请求有经验的大 ...

zhaojunfeng1983 最近时间太紧，有哪位战友知道那个公司做信号通路（western blot）做的比较好，急啊。 AKT/PI3K方面的selenium 我们是专业性做细胞信号转导磷酸化抗体的，WWW.SIGNALWAYANTIBODY.COM,我们有800余种phospho-specific antibody，AKT/PI3K的很好，欢迎联系我，025-86975628-8012，夏先生，xsk_bio@163.comyun ...

yukituki 最近做Akt的WB遇到了问题：我用的是CST的Akt抗体以及pAkt抗体，染小鼠组织（肝，肾，脾，肺，脑等）。5%BSA（TBST稀释）4度封闭过夜之后一抗是5%脱脂牛奶稀释，1：500，过夜，二抗1：2000稀释，2-3h染出来的片子很脏，而且Akt勉强可以见到，但是pAkt没染出来条带提组织用的是RIPA（每100mg用500ul），加了PMSF以及NaF，冰上操作，裂解1h，4度离心30min，取上清。各位 ...

bowenwei P53蛋白可以用WESTERN BLOT法测定吗lnzyxyqy2003 可以啊fangweibin119 当然可以这个蛋白还是很好做的哦jgl2008 请教版主，这个p53蛋白在hela细胞中的检测如何，我做了好久，均未见条带，可否赐教下呢，感谢！忧兴逸亡 看下P53存在于细胞那个部位，是不是你没提取出来jgl2008 p53是核蛋白，我用的是单去污裂解液提的是总蛋白，以前检测过一次，出来啦的，但是条带很细，不知为何 ...

tyoutei 我做wb，ECL发光的时候，在发光液里能看到清楚的条带，但每次拿出条带准备压片的时候，条带就消失了，怎么都压不出来，请问是什么问题呢？bianbenjamin 二抗浓度过大，迅速淬灭了tyoutei bianbenjamin wrote:二抗浓度过大，迅速淬灭了谢谢！问题已经解决了，不过是提高了抗原浓度，呵呵！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...

dldenglin 求细胞核蛋白提取的试剂配方，及步骤，最好是亲自做过的方法，万分感谢dldenglin 咋没有人理我呢johndxy117 来源不明，貌似是某文献作者传授给师兄的，自己试过几次，纯度很高，在此表示感谢~密度梯度离心法提核蛋白试剂Buffer A: 1.0mM MgCl225mM KCl10mM HEPES(pH 7.5)protease inhibitors 1:200Buffer B: 0.25mM sucrose in Buffer ABuffer N: 1.1mM su ...

手指爱上烟 在下新手，可能这个问题比较幼稚，请路过高手帮忙！中间的序列代表什么？空白和加号有何区别？多谢！！吴佰霖 空白 很明显是两个位置的氨基酸不一致星号 氨基酸不一样，但是化学性质相近手指爱上烟 谢谢楼上的解答，在别处也得到战友的相似解答——两个残基容易相互突变，因此在比对的时候认为它们相似。序列比对是需要打分矩阵的，蛋白质比对请查询常用打分矩阵如BLOSUM62等等你就明白了http://www.uky.edu/Classes/B ...

zhang7513 请问各位大侠！Myd88代表什么意思？请指教！谢谢！77472087 髓样分化蛋白-88 myeloid differentiation factor 88, MyD88happylife004007 髓样分化蛋白88， 它是一种接头蛋白分子，含有TIR结构域，在天然免疫中介导信号传导。zhouasd 细胞分化因子88.含有TIR结构的接头蛋白刘芯0220 髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88, ...

sissiwubing 我刚做的瞬转，转染效率在80%，希望通过Western看一下表达结果（应该为高表达），有未转染的细胞（应有这种蛋白）作对照。结果未转染的细胞有表达，转染的细胞都没有表达，且ß-actin均有表达。求助各位高手，可能有什么原因，非常感谢freecell 上样的总蛋白已经定量过了？每个样做了几个复孔？这个试验重复了几次？该蛋白是否本底表达水平过高？sissiwubing 上样蛋白为四个孔，为两个样分别有两个复 ...

zhtiantao 各位大侠好，我现在正在做蛋白的结合实验，但是做了之后不知道怎么计算结合常数，我用的荧光探针是1-NPN,先加入缓冲液和蛋白，然后梯度加入荧光探针，从2uM一直加到20uM，每个浓度得到一个相应的荧光值，现在很多文章上写就是根据Scatchard方程计算结合常数，我不知道怎么算，请高手指教，谢谢！！waterbeijing 到底是什么蛋白结合实验啊，说清楚了大家才好对症下药啊lastone9853 参考你 ...

lnu2005 请问个位达人，有谁用过这种载体，在表达蛋白的前面有GSSGSSG 末端有SGPSSGfreecell 我把“GSSGSSG”放进google.com里面，第二个结果就是。自己为何不尝试先动手搜索一下呢？lastone9853 版主说的对～本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

kevenhui 求教高人，如何在http://www.ebi.ac.uk/网站上作多物种Pendrin蛋白保守性分析呀。gingivalis 打开网站，选择 tool - sequence analysis - ClustalW2 ，新的页面打开以后，输入fasta 格式多个序列。 然后 RUN。kevenhui 谢谢高人，问题解决了 (~R~S~S~undefined) 嘻嘻……本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shi ...

ydh790214 请问有小鼠的组织特异性表达查询工具吗？多谢！freecell http://www.informatics.jax.org/expression.shtmlhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2438328/ydh790214 freecell wrote:http://www.informatics.jax.org/expression.shtmlhttp://www.nc ...

lsdcfhyj 组成型的stat3的磷酸化是指先由基因先表达出stat3蛋白，再由细胞内的磷酸激酶使stat3磷酸化，还是细胞本身就能直接表达出磷酸化的stat3？谢谢bigbang_0_0 是前者，是条件非依赖的，一表达，就被磷酸化。是不受诱导的磷酸化。且不被去磷酸化。lsdcfhyj 谢谢你的回答，你的意思是细胞中的磷酸酶也不能使其去磷酸化吗？bigbang_0_0 lsdcfhyj wrote:谢谢你的回答，你的意思是细胞中 ...

lwq652 微生物中recA基因编码的是什么酶？他有什么作用，他与限制修饰系统有何联系？对他敲除有何用处？bigbang_0_0 DNA重组，敲除以后就不能重组了，质粒在里面就自由了。lwq652 bigbang_0_0 wrote:质粒在里面就自由了。质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？bigbang_0_0 lwq652 wrote:质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？这个跟RecA的功能没有关系，质粒要保持稳定，除了要敲除感受态细胞 ...

Rachel1123 求助各位高手，RIPA裂解液提取的蛋白可以用于做STAT3的wb吗？还是需要专门提取核蛋白？多谢！顺便再问一句，stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达？wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白！zfyyzz00 一般来说，stat是转录因子，只有磷酸化的stat才有活性，它通过形成二聚体的形式进入细胞核内，和相关靶基因结合，启动靶基因转录，因此一般情况下 ...

myskite 查一蛋白在不同器官组织的表达，用什么网站？slytjiaofei 看看这个是不是有帮助！！！http://bioinfo.wilmer.jhu.edu/tiger/ydh790214 请问有小鼠的组织特异性表达查询工具吗？多谢！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

伽利略 我一直都不太明白，请达人解释下，谢谢bigbang_0_0 蛋白质功能上的变化包括质变和量变两种，所以要检测总的p32蛋白水平。George2 测总P38是为了了解P38的表达背景，以估测激活的P38占总量的比例。伽利略 我是这样想的，请问有何问题P38磷酸化水平若增高不论是否P38总量变化，都能说明P38活跃或者激活，不测P38总量也可以。我看到不少刊物测试某些蛋白功能变化时只测了磷酸化水平，而未曾测该蛋白总量。侠骨 ...

zybaby1008 请教各位，我用酵母分泌表达GFP融合蛋白，酵母中可以直接在荧光显微镜下观察到绿色荧光吗，我曾经观察过，但是，野生酵母也能看到类似绿色荧光，还想请问怎么区分背景和真正的荧光呢，感谢大家的帮助！侠骨仁医 应该是可以直接观察到的，强度肯定是有区别的，野生型的应该只能看见一点轮廓，而不是真正的绿色荧光，还有就是应该可以利用流式定量检测。zybaby1008 非常感谢楼上的战友，恩呢，照片现在不在手头上，今天上传 ...