蛋白质技术

iamgarfield 如果某受体的酪氨酸磷酸化位点众多，外加某一刺激因素，检测该受体是否发生磷酸化，一定先要把所有该受体的酪氨酸磷酸化全部沉淀下来，再用该受体的抗体去做WB（或者反向做）。如果只是把与我要研究的下游信号途径相关的几个磷酸化位点挨着做WB检测，能行吗？jz2298 买抗体就可以， western blotiamgarfield 哪种做法更全面，更能说明问题呢？因为看到国外文献绝大多数都是采用的IP,不知道是出于什 ...

winniw214 有一个蛋白，我想把它denature之后再进行refolding。（这样可以加入一些调节因子之类的）我想问问具体的方法。网上搜到的都语焉不详。最好有buffer配方和步骤。有相关参考文献也好。谢谢！！蛋白大小为27kD.N端亲水，C端疏水。全蛋白不溶zhujoker 请参考以下两个链接：http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=F5674C5F-89 ...

天心令 本虾米急需知道puromycin resistance protein （puroR）的KDa量是多少在google上，pubmed上，搜了好些天，都没有搜到请高手们指点指点在pubmed的protein上搜索，它有氨基酸数目的显示，但没有分子量的显示。谢谢各位先woxingwosu 最好把你的搜索到结果的网页发出来，或者是pubmed的地址，这样才好给你分析。那你有没有找到puroR的基因序列呢？如果有的话，可以自己通 ...

chenccy 各位老师好，我想问一下，如何寻找一个已知蛋白和其他因子是否结合，以及探寻该蛋白是否作用某些未知的基因？问题问的不好，希望各位老师能帮忙吴佰霖 Co-IP,打质谱woxingwosu 1） 如果是要检验一个蛋白和另外的一个目的蛋白是否结合，有很多方法，包括免疫共沉淀（IP）,pulldown（包括GST和His tag的pulldown等等），免疫荧光染色共定位，BIACORE，FRET（或者BRET）甚至还有超速离心的方 ...

zhubest 我正在克隆一个八百多bp的基因，换了很多载体，表达条件换了不少，可始终不能得到可溶的蛋白表达，哪位大师能够支招，可以提供一些表达条件，谢谢了freecell 可以尝试真核表达系统，例如杆状病毒系统或者毕赤酵母。vbvbvbfgiw 先得确定连接转化都成功了吧，换一种裂解细胞的方法试试（溶剂），使你的蛋白溶解。版主freecell留言:您误解楼主的意思了。zhubest 谢谢版主啦，不明白为什么包涵体始终不能通过变 ...

lope 用WB检测beta-catenin的活性，应该是一种检测磷酸化水平，一种检测核内水平。用前一种方法可以省下一个核内参，需要同时检测非磷酸化水平的吗？而我看到的文献似乎还是检测核beta-catenin更多，请问前辈们是不是检测核蛋白更容易出结果呢？ylhuang0502 如检测磷酸化水平，LZ还需要检测总的catenin （磷酸化和非磷酸化都识别），将p-beta-catenin/total beta-catenin处 ...

月下独见 哪位高手知道蛋白质入核抑制剂有哪些？？哪个公司有卖的？zhujoker 我不是很清楚你问题的来源，但是有一点你要清楚，没有一个试剂能够抑制所有蛋白质的入核，所以你问问题事最好说清楚一点月下独见 目前我正在研究一个基因，它表达的蛋白是要入核起作用，老板让我去找抑制这个蛋白进入细胞核的试剂（当时老板说的是核质穿梭抑制剂），可是我找了很久都没找到。老板说原来有师姐用过，可是我去问过那个师姐用的是出核转运抑制剂Lept ...

wulingjie2008 (重复发贴，请版主见谅！)各位老师你们好！我是一名刚踏入研三的小硕，做了一年的基础实验，现在实验结果都出来了；但在分析时发现，所做的三个细胞因子中，有两个细胞因子的转录水平与其蛋白表达水平不一致；也就是说某组病人的细胞因子转录水平明显低于其他各组,且该转录水平与临床资料相关；但其蛋白表达水平却是高于其他组别，而与临床资料无相关性；对于这样的情况，我该如何解释实验结果？望请各位老师给予指点， ...

hxf_86 各位大侠，小弟请教一个问题哈～现在想寻求一方法，特异性的阻断细胞内一个蛋白（暂且叫这个蛋白叫B）的作用。以下是一些背景：1.蛋白B是从一个大蛋白（暂且叫作蛋白A）中水解下来的2.B从A中水解下来是自然现象，水解下来以后呢，A和B都有活性的3.现在想特异性的阻断B的活性，但是要求是不影响A的活性，所以不能用RNAi4.如果是用抗体的话，请问抗体能进入细胞核吗？谢谢各位大侠啦～hxf_86 哪位大侠能给予我帮助啊～有 ...

ahuchxq 最近做IkBa，用的santa cruze的抗体，过去用的抗体都特别号只有一条很特异性的条带，但是最近换了相同货号的另一个批次的抗体上面总是有一天很浓的非特异性条带，配的10%的胶，12%， 8%的，都是分的不开，也尝试过跑的时间久点，可是都分的不是很开，有时候偶尔会分的比较好，就是明显能看到时两条带，很烦人，而且还很浓。不知道该怎么办？请求高人指点指点！感激不尽！karoleaf actually you don't need to ...

olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况（包括时间点），那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法？加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液？ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法？A1.: 不要用胰酶消化， 贴壁细胞处理后，立刻至于冰上，用PBS洗三次后，直接加lysis buffer裂解提蛋白，lysis buffer的组分可查查文献，或在本版搜一下。Ｑ２加药前？视情况而定，一般不必要加，但 ...

olivial 最近想做caspase-3的WB，但关于caspase-3的活化有一个问题一直没弄明白，想请教。在没受刺激前，细胞内的caspase-3以procaspase的形式存在，当受到内外源性刺激时，被活化成异二聚体，该异二聚体由p12和p17两个亚基组成。但procaspase是怎样变成异二聚体的呢?是self-cleavage，还是上游信号如caspase-8、9裂解的？selenium Cleavage by gr ...

ahuchxq 最近提NF-kB的核蛋白，是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer，一个低渗的提胞浆蛋白，一个是高盐的提核蛋白的缓冲液，我想问的是，有没有可以不加核蛋白的buffer 直接把胞浆蛋白提取来后，直接加SDS 裂解液裂解上样做的?谢谢大家提供点信息。。。fangweibin119 ahuchxq wrote:最近提NF-kB的核蛋白，是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer，一个低渗的提胞 ...

memoday 最近在做一个信号通路的下游磷酸化水平检测，但是做western没有看到任何条带,包括p-ERK,p85。麻烦各位战友帮我分析一下可能原因吧：1.293T细胞转染质粒（带外源基因），24h2.无血清培养18h3.配体（外源基因是该配体的膜受体）激活，37度，10min4.PLB（promega公司）裂解细胞，做western，抗体是SANTA CRUZ公司的p-ERK (Tyr 204)，以及cell signaling公司的 ...

songling8205 本人正在做蛋白检测，想知道冻存在-80度冰箱里的标本，在进行蛋白提取前用什么方法解冻，有利于减少蛋白丢失，尽可能减少对实验的影响，谢谢相关人士指导！！急求！！！！fangweibin119 把样品放在冰上songling8205 我通常是放在4度冰箱让它缓慢融化的，可是这样造成分离的单个核细胞呈团块状沉积于1.5ML的EP管中，在进行蛋白裂解时细胞团块不易溶解，我对于这个问题不知道怎么解决？求助大家， ...

13163666257 there are many proteins can be constrainted. first of all ,you should find a effective method of target proetin constrainting. you can usesoftware to find a method. the method is better than the method from software. the method adopt software and hydrophilemechanism,compari ...

shuaibo2008 各位好：我是新手，马上要提前细胞磷酸化蛋白做western。不知道在干预前细胞还要饥饿吗？饥饿对磷酸化蛋白表达有没有影响？谢谢帮助哦fangweibin119 shuaibo2008 wrote:各位好：我是新手，马上要提前细胞磷酸化蛋白做western。不知道在干预前细胞还要饥饿吗？饥饿对磷酸化蛋白表达有没有影响？谢谢帮助哦饥饿会有影响shuaibo2008 饥饿会有影响那是不是不用饥饿了还是缩短 ...

hooray365 western结果显示各种检测蛋白的量不一样，但具体多少不知道，有什么软件可以计算出来么，请高手指点，算出相对含量也可以fangweibin119 ImageQuant TL读取积分光密度值kaige88 http://signal.dxy.cn/bbs/post/view?bid=74&id=14981821&sty=1&tpg=1&age=0kaige88 另外参见http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

lishuning2010 我的实验中，Western blot显示蛋白水平随时间延长表达增加，但是RT-PCR结果却显示随时间表达减少，如何解释？zhujoker 那看一下是不是蛋白降解减少？bigbang_0_0 有可能蛋白质的稳定性增加或者翻译效率增加，增加幅度大于mRNA降低所带来的蛋白理论水平降低的幅度lishuning2010 非常感谢给予支持，请问有没有相应的文献给楼上的解释支持呢？比如也有蛋白和基因结果不一致，使 ...

jairsa 求助：蛋白长期保存在处于等电点附近的缓冲液中，是否会影响其稳定性呢？freecell 为何有此说法？一般说如果溶液pH值和其本身等电点相近，蛋白质溶液沉淀。xuezhishui 蛋白质要长期保存最好能够冻干以干粉状保存！另外如果要在缓冲液中保存最好应该避免极端pH值缓冲液和近等电点pH值缓冲液；如果由于实验的需要不好避免的话还是分装以后低温保存，每次解冻后即用，避免反复冻融对蛋白的影响！gaolisuo 在等 ...