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        【求助】蛋白质的denaturing和refolding

        丁香园论坛

        2963
        有一个蛋白,我想把它denature之后再进行refolding。(这样可以加入一些调节因子之类的)

        我想问问具体的方法。网上搜到的都语焉不详。最好有buffer配方和步骤。有相关参考文献也好。谢谢!!

        蛋白大小为27kD.N端亲水,C端疏水。全蛋白不溶
        谢谢版主

        不过我们是用的尿素洗柱的,用GuHcl的效果不好。如果是Urea,要怎么refolding呢?

        谢谢!
        如果你是用8M urea来denature,那么可以采用逐步减少urea concentration来达到refolding的效果,具体可以: 8M, 6M, 4M, 2M最后去掉urea。通常情况下在4M的时候蛋白质已经开始refolding了。

        这个逐步减少Urea的方法可以通过透析来实现,最好在4度,避免沉淀出现。需要找到合适孔径的透析袋,太大了蛋白就被透析出去了。

        顺便提供一下我的refolding buffer的配方把,也蛮简单的,50 mM Tris buffer at pH 8.0(一般认为tris的效果比较好),然后把不同浓度的urea按照量加进去就可以了,但是效果不错的,可以试试。

        还有其他的refolding方法,包括稀释复性,超滤等等,但是我觉得还是透析的最好,不增加原溶液体积,效果也不错。如果楼主需要的话,也可以讨论一下。希望能帮到楼主。
        我认为你用urea和pH双梯度复性较好,可以参阅一篇文献

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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