PCR技术

nvonne 我购买的miRNA mimic 带FAM标记，本打算用流式检测转染效率，但发现荧光信号很弱，转染后采用定量PCR检测miRNA的表达变化，相对定量分析，发现mimic组比NC阴性对照组的miRNA表达量提高了100多倍，这虽然表明转染mimic成功，但总感觉这么高的变化有点太离谱了是不是？也没查到相关文献，谁能给我一些参考？非常感谢zhujoker 顺转就是这么高，我的也是这样，有的能够上调1000倍nvonne ...

biokook 如题，谢谢大家了。zjubell biokook wrote:如题，谢谢大家了。你要做什么序列分析？mapping? denovo?大部分优秀的高通量序列分析软件全是在linux下的velvet, soap, bowtie, etc，还没找到有多少是windows下的biokook zjubell wrote:你要做什么序列分析？mapping? denovo?大部分优秀的高通量序列分析软件全是在linux下的velvet, soap, bowt ...

linjl010 请问各位高手，我需要将1000多和2000多的两个片段连接起来，用重叠延伸PCR技术的方法怎么也连接不起来？（重叠碱基23个）总是扩增出1000多的杂带，没3000多的目的片段，原因可能是什么？希望大家给予指点！谢谢！devil19840 你做extension overlap PCR的多么？不妨将完整的实验方法列上来，包括每步PCR的步骤和回收的步骤、方法~23bp我觉得确实还是有些勉强，尤其你的片段长，如果 ...

ws 各位站友，本人因克隆某个植物抗病基因而完成了其BAC文库，目前正在做图位克隆的工作。但文库的完成耗费了大量人力、物力和财力，因此想请教下该库还有什么其它用途。或与其它技术结合，可开展什么工作。谢谢了。。。。zhujoker BAC (Bacterial Artificial Chromosome, 细菌人工染色体)文库是进行全基因组测序、构建物理图谱、染色体步查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之 ...

saga2230 最近一周做的rt-pcr实验，动物肝组织提取RNA。结果β-acitn出现了杂带。这是第4次重复的结果，之前的结果都很好，只是这次有杂带。可能是样品放置时间过长了，肝组织在-40冰箱里未加其他试剂放置20天左右。其中的原理好像很复杂，这个我没有专门学习过。问了周围人，有3种说法，1二聚体，2特异结合，3杂dna引入，但都说的不清楚，只是说有可能是这样的。。谁能帮忙分析下是什么原因啊。。。westernblo ...

zx13763431 小弟新人，现在**犬类TGF-β1mRNA和内参照β-actin基因大小（bp数）？？小弟谢过了~把引物序列放在下面。谢谢各位大虾~~TGF-β1引物上游引物序列为:5’-GCTCCACGGAGAA-GAACAGGCTG-3’，下游引物序列为: 5’-CTGCTCCAC-CTTGGGCTTGC-3’；内参照β-actin引物上游引物序列为：5’GTGGGCCGCTCTAGGCACCAA-3’，下游引物序列为: 5’CTC ...

shengmaolin 各位大侠，小弟有个问题想请教。NF-KB p65能不能做RT-PCR？怎么在Pubmed的Nucleotide上找不到人的NF-KB p65的核苷酸啊！找一个药商帮设计的上游引物：5’- GGGATGGCTTCTATG-3’ 下游引物：5’- GTTTCGGTTCACTCG-3’，查了下好像不对。到底怎么搞的我也不清楚，请各位老师指点！谢谢！shengmaolin 帮帮忙，大侠们！brucewu1986 是不是人的p65啊p65 ...

kw412573902 大家好，有个十万火急的问题想得到大家的帮助：我们经过深度测序找到了一批rna，由于得到的序列结果是测序时的RNA经过公司逆转录并扩增成为PCR产物的序列，所以现在需要设计两个不同方向的逆转录引物，进行RT-PCR，确定RNA到底是正义链上的还是反义链上的序列，之前做的都挺好的，但是后来发现所有的序列都是两个方向都有的。。。而且之前的实验结果也重复不出来了。。。。我已经把所有RT-PCR过程中用 ...

叮当儿 各位大侠，小妹要对HCE细胞的Toll样4受体做检测，但是细胞自身表达量太低，正常细胞提取RNA之后做逆转录都没有结果，而且我还要对其表达进行干扰，转染shRNA进去，结果就是做pcr时更没有结果了（内参很好），PCR反应条件如下：20ul volumcDNA loading 3ul10xtaq buffer 2uldNTPs(2.5/each) 2ulMg2+ 1.5ulprimer(F+R) 0.2ulTaq 0.2ulddH2O 11.1ul94℃ 3 ...

yuanliang0828 请问real time PCR与RT PCR有什么区别？我想在不同时间点验证某种蛋白表达增多，可以用RT PCR吗？baby_susan RT PCR 从名称上讲 可以是real time PCR的缩写，也可以试是反转录PCR 的简写另外real time PCR和反转录PCR区别主要区别是，前者可以定量，后者只能定性看看你某种蛋白的表达增多还是减少，存在不存在，不能看出增多或较少多少melody405 real time PCR又叫Q-PCR， ...

lmllml 这个是我今天跑的很失败的普通PCR结果。我是一个新手，所以···实在很失败cDNA做的PCR，反应体系是塔克拉的，那种非预混的酶体系胶是2％的可是结果，这些条带很奇怪···求教高手···万分感谢！yuzhiming 电泳液换新的。胶浓度不要那么高。0.8-1%即可！lzrzrl 是不是电压的问题knightkidd 应该是电压的问题，电压或者电流太高了把，我也出现过类似情况，跑慢点就好了！orforu 缓冲液的问题wanchua ...

琼琼qiongqiong 请问各位：买抗体和PCR试剂哪个公司好点？？？希望大家多多推荐，我是新手，没有经验！先谢大家 啊。biolinkphilic 这个看经费和采用的研究手段，以及对结果的要求综合起来再做决定吧。noforever_hh 我们的购买抗体做法是：1；实验室如有人用过，效果不错，就沿用。2；没人用过不了解，就查文献，级别高些的文章，看人家的结果，然后参考他们的试剂选择的公司。PCR的试剂现在很成熟了，几个大公司的都不错， ...

gaimong 有一个问题想请教一下大家：已知一蛋白N端和C端部分氨基酸序列，如何从基因组中将目的基因克隆出来，并对表达产物进行鉴定？查了一下资料，好像说用简并引物PCR可以，不过对这种方法不太了解，所以也不太确定。希望有高手能指点一下，谢谢bigbang_0_0 用简并引物屁一下cDNAholywater 太简单了，查NCBI blast.,,本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

leileicui 在看文献是发现这些问题：miR-23a RT GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACggaaatPCR sense GCGatcacattgccagggThe same antisense primer was used for all miRNA PCR : GTGCAGGGTCCGAGGT（问题，1所有的miRNA序列可以用同一个反义序列吗？问题2：这里的正义和反义引物是不是就是其他文章中提及 ...

leileicui 如题，因为新手没有做过实验，所以请高手详细指点，如果有比较好的文章可以推荐给我，谢谢。为了方便讲解，以mir127为例，逐步讲解，谢谢leileicui 自己顶一下。freecell 这个你可以在google scholar里面搜索这个miRNA的qPCR引物，太多了。可以借鉴nature、science等文章中的引物和探针。其次可以自己设计，例如： http://www.exiqon.com/miRNA-qpcr-d ...

sophia1842 哪位好心人，能不能提供一下鼠源的SRY基因（Y染色体上的一个基因，可以区分性别），普通PCR的引物，我找了好几对都不行啊，感谢啊freecell 在google scholar内搜索nature、 cell上面的引物。sophia1842 我找的引物，基本都是08年以后，影响因子7以上的啊woxingwosu 呵呵，那是不是你的系统有问题呢？不可能这么多影响因子7以上的文章的引物都不行吧？本文由丁香园论坛提供，想 ...

琼琼qiongqiong 各位高人：大家好！我是新手，要开始做实验了，请问大家哈，葡萄糖转运蛋白-1的引物和探针要怎么设计啊？有知道的麻烦给我回复哦，急需，非常感谢！阿修罗axuro 先去NCBI里找到你要的基因核酸序列，然后用引物设计软件设计引物。弱弱的问一句：都没人带的么 ？琼琼qiongqiong 没人，就靠自己，好可怜的琼琼qiongqiong 忘记说了谢谢你啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫 ...

lujunping 由于条件所限，标本只能放在-20度冰箱然后集中处理。请问，是否能够从组织中提取基因组DNA，然后通过RT-PCR的方法检测疾病组和对照组目的基因的表达水平吗？常用的方法都是抽提组织RNA然后逆转录为cDNA再检测的。谢谢！wangke80 基因组DNA和RNA是两回事，楼主首先得弄明白你们的研究目的是什么。表达水平肯定要用RNA了，基因组DNA不可能反应出两者之间的所谓表达水平。lujunping 疾 ...

mushuixiaotaozi 麻烦问一下大家，如何分析real time PCR的结果，用的是SYBR Green的方法，做相对表达量的分析。结果怎么作图怎么描述？升高或者降低的倍数达到多少才有意义呢？wangke80 这个问题你查两篇国内或国外文献就知道了，或者直接百度一下。简单说就就是运用2-deltadeltaCT运算最后的结果和作图。不在于升高或降低多少倍数才有意义，而是统计是不是有意义。mushuixiaotaozi 我 ...

xueer8847 请教：Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR.这篇文章的出处“Nucleic Acids Res, 2005, 33(20): e179.”中的e179代表什么，有谁知道这篇文章的起止页码的啊？谢谢！zhujoker e179代表其在那一期的序号，也就是说这篇文章在那一期为e179，原文附上xueer8847 多谢！：）dnazyme 其实这个杂志很特殊，e代表比期更小的一个单位，比 ...