PCR技术

随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现。尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展。如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)等等已成为基因分析的有力工具.但这些方法操作比较繁琐，局限 ...

PCR技术简介　前言一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。何谓PCR简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 (In V ...

生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9me ...

AIB1-U primer (5'-ATA CTT GCT GGA TGG TGG ACT-3'; sense; positions 110–130; GenBank accession no. AF012108)AIB1-L primer (5'-TCC TTG CTC TTT TAT TTG ACG-3'; antisense; positions 458–438; GenBank accession no. AF012108);如上为我的目的基因上下游引物，请各位同道帮忙用软件及blast分析一下，本人非常焦急，因试验结果很不好，正在 ...

大家好,我都快急哭了,希望各位多多关照...我刚进实验室,老板就给我一课题,就是做病毒外壳蛋白基因的原核表达,我查了大量资料,一点头绪都没有.首先我要设计引物,这是我最大的难题.因为没有人带我,只有自己摸索,万般无奈下,我只好来到丁香家园向大家求救.下面是我课题一些情况:我要作的病毒CP基因序列:ORIGIN1 atgggcacca acaagccagc cactctagct gatttgcaga aggcaattaa tggcatctc ...

用石蜡组织提DNA做MSPhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6074962&sty=1&tpg=17&age=0【求购】求购内切酶BbsIhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5999059&sty=1&tpg=29&age=0【求助】http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6081074&sty=1&tpg=16 ...

感谢您的积极参与！银染背景深怎么回事此引物设计是否合理RNA 2100bp,ORF框1600bp 如何设计引物求教长链PCR扩增的问题哪位有35S启动子和 Nos 终止子的比较成熟的引物序列求助关于制作和应用PCR诊断试剂盒方面的资料MSP中醋酸铵用法MSP不见条带做病毒的基因的RT－PCR能否用oligo（dt）？急需有关基因测序方面的问题和测序仪发展史 多重pcr上下游引物Tm不同，该如何安排反应体系扩不出目的片段这个 ...

献给丁香园新站友1.Primer premierPrimer premier5.0http://www.premierbiosoft.com/DATAFILES/PP500Installer.exe注册机http://www.dxy.cn/bbs/user/download/471211/primer%205.0%E6%B3%A8%E5%86%8C%E6%9C%BA.zip使用教程http://www.bio-soft.net/down/PPr ...

我以前在一家引物合成公司做技术支持，主要解答客户各种因为引物质量问题引发的实验问题），现在自己合成引物自己做实验用，对引物质量问题有了更进一步的认识，写出来跟大家共享一下吧，也让大家能判断什么时候是自己的问题，什么时候是运气不好碰上了小概率事件，什么时候是合成公司的问题。我也顺便整理一下思路，最近一个月一直看那些引物合成的文献，头都大了。现在引物质量问题主要体现在三个方面：1、pcr产物测序发现引物部分碱基错误 ...

我对引物设计的一些建议很多人都想学会引物设计及软件的应用，这些其实很简单，看看书大致原则就清楚了，但仍然很少有书介绍引物的设计流程，我将自己的一点体会在这里和大家交流。但愿初学者能有所收获。1．首先要明确设计引物的目的。是检测还是构建，是克隆还是表达，表达还分原核与真核表达之分。检测：一般说来，检测引物的设计相对简单。但若要求特异性，则需分析被检测的基因是否有高度同源性，这一般在引物设计完后在genbank上bl ...

聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆Ⅰ、 概 述　　PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下,以目的DNA为模板进行 ...

PCR反应模板的制备　　PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高 模板核酸的产量.　　传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组份，溶解细胞膜， 使蛋 ...

PCR实用技巧增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互补, 否则容易造成DI ...

我要得到的目的片段的序列如下：1: BD073420. Utilization of tr...OCUS BD073420 1266 bp DNA linear PAT 27-AUG-2002DEFINITION Utilization of transcription factor Brn-3a.ACCESSION BD073420VERSION BD073420.1 GI:22619023KEYWORDS JP 2001511344-A/2.SOURCE Mus musculus (house mouse) ...

谢谢各位的解答，SORRY，这几天没上来，我的序列如下，请帮忙看一下：NM_190847. Oryza sativa (jap... LinksLOCUS NM_190847 1692 bp mRNA linear PLN 07-OCT-2003DEFINITION Oryza sativa (japonica cultivar-group) putative pectin esterase(P0415A04.26), mRNA.1 atgggtatca tccaccgagg ggacagcaca gtga ...

各位大虾：我做巢式PCR，内外侧引物条带均不对，作了N次，还是找不道原因，请各位帮忙分析。1、引物：The fisrt pair primer:5'primer:5'CAC TAG AAT GGG CAA CTG GTA GC3'(2-24nt)3'primer:5'CCG AGT ATA CGC ACA ACG CA3'(937-956nt)The second pair primer:5'primer:5'GCC GAA TTC ATG CTC CTA TCG CGG ATT3'(ECORIsite)3'primer:5'GAC CTC ...

文 / 屈武斌 (quwubin@gmail.com)多重PCR引物设计，一个重要的方面在模板序列的预处理，处理好了后面的引物设计将事半功倍。问题：假设我们要对6个模板（基因）序列设计6对引物，每对引物特异性的扩增特定的模板序列。针对这一问题，首先我们要设计6对引物，这6对引物要在一个体系中反应，因此彼此之间不能产生二聚体，最好它们的最佳退火温度相同，不能发生非特异扩增。要实现上面的目标，比较复杂，这里先从最基础的来说，即模板序 ...

这是我做PCR后跑的6%琼脂糖的电泳图。请各位分析一下，谢谢。我扩增的目的DNA只有59个碱基，一对引物只有12bp长，都是由公司合成的。我的反应体系如下Taq E.(5U/ul) 0.5ul1undefinedBuffer(Mg2+ free) 5ulMgCl2(25mM) 3ulundefineddNTP(各2.5mM) 4ulprimer1(20uM) 2ul （Tm=51.4）primer2(20uM) 2ul (Tm=44.6)Template(10ng/ul) 10ul (59bp ssDNA)dd ...

请教：高保真酶 关于taq plus 求教Pfu酶作PCR的要求 Pfu扩增求救！！！！ 请问哪一种高保真DNA聚合酶比较好呢？Pfu DNA 聚合酶的问题 pfu的扩增条件！ 关于高保真酶问题？ 求助：高保真酶关于高保真酶关于高保真的酶 pfu高保真酶怎么那么难用？Pfu DNA聚合酶------常见问题 请教如何做病毒的 pfu 请教Pfu扩增2kb片段 高保真酶咋还不如普通的Taq酶?请教关于高保真酶问题哪个公司的长距离TAQ酶好?请教长片段的PCR克隆技术 求助：大片断PC ...

我最近设计引物有些困难，我要扩增EBV的BNLF1基因(编码LMP1)的cDNA,两引物各带EcoRI、BamHI 的酶切位点，但是两者的Tm值相差太大，实验时间紧迫，望各位高人替小女子改一改。无限感激！！！！！此致敬礼！！！EBV（B95-8序列，Genebank Acession NO.V10555，1999年）的LMP1的编码基因BNLF1的基因序列（只给出内含子、外显子的序列）：Exon1:169207-169474nt（267b ...