PCR技术

yolanda2122 我正在一个人源细胞的PCR，需要设计GADPH和LOX-1,THF-a,IL-1,IL-6,我用PUBMED搜出来的有些有好多选择，不知道该用哪一个啊，有没有高人指点一下，第一次做，完全没概念，谢谢zjubell 还是直接找以前的文献吧，人的么，大部分都有人做过了。http://www.rtprimerdb.org/http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/当然自己设计更能增长 ...

绣面芙蓉 如题，细菌做DGGE一般是用16S，真菌的有没有，ITS还是18S，GC夹要用什么，加在哪里，上游引物前还是下游引物前？我找过很多文献都没有找到完整的，如果能给出序列（包含GC夹）或者给出相应文献，丁当就奉送。zjubell FUNGI - UNIVERSALNameRegionFragment SizeSequence (5' to 3')ReferenceITS118S570–590TCCGTAGGTGAACCTGCGGWhite et ...

hanrui1009 小女子是新手，最近忙于做一个抗病基因的克隆，基因的片段大小7010bp左右，打算采用PCR的方法克隆，Taq LA polymerse和29bp的特异性引物，扩增不出来，请高手指点啊！zjubell 扩不出来太正常了。可能你的模板根本就没有，或者降解，或者表达很低。另一方面，这么长，聚合酶可能在中途就掉下来了。建议你分段扩增。比如分成5－10个PCR，每段扩600－800bp，设计一些overlap的区域。最好 ...

gretahill 我用NBCI的BLAST核对引物，下面出来的描述性的格里有accession,description, max score ,total score, query coverage, E value, max ident, links项目，这些都是什么意思？在核对引物可用性时哪些项指标较重要？谢谢qq890914 传个资料给你，自己学吧！gretahill 看中文比看英文舒服多了，非常感谢luwei2004 太好了，正需要这个。谢了！拿走了染景帆 好东西啊 ...

jiang104820 请问各位样本在负80度放了一年多，对荧光定量PCR的结果会不会有很大影响啊？我前几天做了荧光定量PCR，对照组的样本是新收的组织，而实验组的样本是一年前收的，跑出来的结果几乎所有指标都跟表型相反，很郁闷啊！求解答！谢谢shylook 跑PCR看看rna降解没jiang104820 shylook wrote:跑PCR看看rna降解没负80度储存是组织块形式储存的，RNA是我做PCR的时候提的，测浓度 ...

jerome520 我现在急做一批样本的microRNA检测（只检测一个指标），用茎环法，想要送去公司做。康成生物高手们有听说过吗？还有其他代做的公司推荐吗？谢谢！！！zaoyii 我知道广州伯信生物技术有限公司可以做，技术上也比较成熟，这是网站http://www.biosensechina.com/，你可以去看看或者打电话去问问：020-28069086jerome520 zaoyii wrote:我知道广州伯信生物技术有限公司可 ...

elainesummer 请问 鉴别某种细胞中有某个基因表达 是做PCR 还是做RT-PCR？elainesummer 为什么两篇文章一个用PCR 一个用RT-PCR 到底应该是哪个？还是两个都对？elainesummer 第一篇elainesummer 第二篇elainesummer 有人知道吗？elainesummer 顶啊！elainesummer 没人回答吗？nono1986 RT-PCR!elainesummer 人气好弱啊！本文由丁香园论坛提供，想了解 ...

大鹏鸟 做microRNA反转录，查文献用到的是如下引物：5′-GCGAGCACAGAATTAATACGACTCACTATAGG(T)12Vundefined-3′，V_~L_A~E_G~E_C~J_N_~L_A~E_T~E_G~E_C.请问订购这样的引物应该怎么跟公司说啊？是就这么说呢，还是应该排列组合把所有可能的序列都告诉他？freecell 你只需要把序列这样递交给人家，合成的人懂的。在备注里说明一下V和N是什么。至少我在IDT和sigma就是这样递交的。价格都是按照碱基个数、合成规模、纯化 ...

xiaorui3510 敢问各位大侠怎么利用两种基因的同源序列来设计引物，比如说我用人源Mcl-1基因序列和褐家鼠源Mcl-1基因序列两者的同源序列来设计引物？希望不吝赐教！呵呵万分感谢。。。dolphin_705_200 你是想设计一对引物对两种种属的基因进行检测是吧。先将两个基因的序列进行同源性分析，然后在差异较小的区域设计引物即可。PCR时有几个碱基不匹配没有关系的，但是要注意，这些不匹配的碱基尽量不要在引物的3' ...

liupeiyanxiaohai 小女子近来开始做chip，结果pcr后input的条带很亮没问题，只是阴性对照（加的是同种属的normal IgG）也出现了条带，而且和目的抗体的差不多，后来怀疑是交联时间太长（20min）随减为5min，10min还整了个没加抗体的做对照，结果还是加IgG和没加抗体的对照都有条带出现，怎样才能阴性对照没条带，还有就是超声怎样才能避免气泡的产生呢，每次超声都有大量气泡，求高人指点。实验 ...

xumin520jie 谁能帮我设计一下14-3-3η的全长引物。需要加上酶切位点正义链 XhoI CCG（保护碱基） CTC GAG反义链 Xba CTAG（保护碱基） TCT AGA14-3-3η的全长序列其中 Cds 176..9161 tgcagccagc tagcgagaag gcgcgagcgg cggcgcagcc agcagcctcc cgccagccgg61 cgagccagtg cgcgtgcgcg gcggcggcct cggcggcgac cgggaagcgg acgggc ...

wx275411643 本人是新手，现在做课题，想请教一下，什么叫tagSNPs、 HapMap SNPs、 untyped SNPs ？它们有什么地方不同吗？尤其是untyped SNPs。先谢谢各位学长学姐们帮助！lide658 tag SNP 是指标签SNP，一般与其他的SNP相连锁，所以具有代表性的SNP。HapMap SNP 是指HapMap 数据库中的SNP，其包括tag SNP。untyped SNP? 我没有见过这个名词，但是按照我的理解是不是指对于这个SN ...

wx275411643 本人是新手，现在做课题，想请教一下，什么叫tagSNPs、 HapMap SNPs、 untyped SNPs ？它们有什么地方不同吗？尤其是untyped SNPs。先谢谢各位学长学姐们帮助！biolinkphilic A tag SNP is a representative single nucleotide polymorphism (SNP) in a region of the genome with high linkage disequilibrium (the non-random ...

人人都爱小勇哥 我提取植物基因组DNA ，并设计引物进行PCR反应，但是出现弥散现象，弥散部位很很亮，然后我进行胶回收，在切胶过程中切取较量部位，然后进行回收，电泳检测发现仍有弥散。不知道是怎么回事，希望各位高手给予指点，谢谢！！lifz2001 弥散原因很多，贴个图看看。体系？反应条件讲清楚？wangch84 降低引物浓度和模板投入量本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的 ...

小鱼鱼小溪溪 条带有两条。一条为目的条带，479bp，另一条不知道是不是非特异性条带，241bp，两种条带都很清晰，如图所示:前三个泳道是样品，后三个泳道为内参。循环条件：94℃5 min；94℃30 S，60℃30 s，72℃30S，34个循环；72℃5 min。退火温度提高至62℃，仍然为两条条带，不知道是条件的问题还是引物特异性的问题，请教各位高手帮我解答。济南基美 如果普通PCR定量，可以不用管它，但从位置看是不是污染了内参的引物wgfki ...

laide 各位PCR高手：本人新手，想要用PCR的方法，用高保真的DNA聚合酶扩增一段长度为2700bp的DNA，用于基因克隆。但本人担心PCR后产物片段可能突变。由于没有做过，我想实验前预先评估一下整个实验的风险。故向各为有经验人士请教，用高保真的DNA聚合酶扩增，能否保证2700bpDNA不突变？还有哪些可行的措施可以保证整个PCR过程的保真性？欢迎各位高手赐教。济南基美 循环数不宜太多，突变在PCR中是积累的。 ...

赵东生 哪位大侠知道有没有哪家公司提供MicroRNA引物（茎环+上下游）设计服务的啊？另外有没有相关软件啊？liqiangs invitrogen公司可以，颈环结构引物好像是ABI的专利，invitrogen和ABI合并了所以这方面应该是强项myskite 自己设计http://www.dxy.cn/bbs/thread/17643030#17643030本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验 ...

lvxue1021 我分两次提的心肌的RNA，同是我的空白组。然后PCR、电泳，但是电泳后的目的片段长度第一次在200bp左右，第二次在300bp左右，而200bp左右的才是我要的目的片段。到底是怎么回事啊，大家有没有遇到过这种诡异的事情。ningmeng1119 理论上不会出现这样的情况，你再做一次看看结果怎么样，中间的操作有没有什么不一样的？lvxue1021 操作都是一样的。第一次做的一个样，因为第一次做，比较精细，第 ...

wj1989113 最近在构建一个质粒。根据我的目的基因序列，筛了两个酶切位点，而且只有这两个酶切位点能用，XbaI和EcoRI,设计引物时XbaI 加了两个保护碱基，EcoRI 加了三个保护碱基。根据takara公司的说明，选择了共用Buffer1xM,酶切，连接，转化之后挑克隆，抽质粒酶切鉴定，发现都是空载体。网上说XbaI对甲基化敏感，有什么对策？因为我别无他选，只能用这两个酶。不胜感激！！！gisang 双切之后跑电泳了吗，有 ...

俊桃桃 想问问，有没有一些预测网站。通过某些基因3'UTR区的rs位点预测出与该点相结合的microRNA呢？谢谢lide658 目前好像没有这样的网站，所以你只有先确定靶基因然后与其结合的microRNA位点是否存在多态，而且一般要求SNP位于microRNA的种子序列中最好。俊桃桃 谢谢你，我是已经靶基因（通过文献查到的）不是通过软件预测的。但是我怎么知道他和microRNA结合的区域呢在哪里，更不知道结合区域是否存 ...