RNA实验技术

qingyuansw20 问人要了个siRNA质粒，但是没有GFP荧光，无法检测转染率。于是又要了个有GFP的质粒。这个GFP的质粒和siRNA质粒区别就是一个有荧光一个没荧光，一个没干扰序列一个有干扰序列。问题：两个质粒共转染细胞能检测转染率吗？只转让GFP的质粒能反映siRNA的转染率吗？kern6549 当然不能。mayle 可以做一下western本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的 ...

heychristy 各位大侠 像高手请教两个问题，我以前帮过很多别人呢，希望高手们指导一下：一 我想做siRNA方面的实验，想直接合成siRNA，然后用脂质体转染，想请问是不是直接合成 21bp的正义链和反义链互补的siRNA，然后用不用退火使两者形成双链，是直接转染合成的两个单链呢 还是转染退火以后的双链siRNA？二 如果我想重cDNA用PCR获得目的基因，因为CDNA是不含有内含子的，但又含有5，端和3，端得非编码区，那我设计 ...

clariceerica 笨人多作怪,刚开始试验周围没有师兄师姐的临床菜鸟,请原谅.1,NCBI查到的基因序列应该是cDNA把,有什么办法能以图片或什么易理解的方式显示它在总DNA中占什么位置么?比如之间的intron之类.有文献提到一个叫GRAIL的软件,不过好像过时了,下不到.2,那个cDNA有7k多长,翻译出的肽只900多,是因为翻译前剪切么,又有什么方法能看到cDNA里那些是coding区呢?3,分离外周血T ...

lyingfei 各位同仁：最近浏览了一些最新文献，计划选取某一miRNA 作为研究目标，讨论它与胃肠道肿瘤的关系。但仅有1篇文献简单提到过它在胃肠道肿瘤的表达异常。因此觉得立题是否成功的首要问题是该miRNA在该正常组织和肿瘤组织中表达是否有差异。如在正常和异常组织中均无表达，则该立题无意义。如有差异则故事可继续。因此，我请大家讨论在科研立题中，除了做必要的预实验来证明某一miRNA在正常和异常组织的表达差异，仅根 ...

springhello 转录起始位点是不是第一个外显子的第一个碱基？song333 yes版主zhujoker留言:不清楚不要妄下结论！woxingwosu 我觉得不一样，转录起始位点应该在第一个外显子的第一个碱基的上游。转录起始位点是DNA分子中开始RNA转录的位置，而第一个外显子是经过剪切后留下来的第一个外显子，一般来说，应该在其5’还有一段UTR序列（还是在转录起始位点的下游），因此一般来讲，转录起始位点应该在第一 ...

springhello 请问大家，转录起始位点是如何定位的？谢谢woxingwosu +1是指与新生RNA链第一个核苷酸相对应的DNA链上的碱基，即转录起始位点（TSS），一般都是A或者G开头。目前有一些软件可以预测TSS，网上搜索一下就有了。kongxingxing123 你可以做一下5‘-race实验来确定转录起始位点。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

twinkling0 请教一下，我是新手，刚开始做miRNA荧光定量。内参是5sRNA，3个待测miRNA。逆转录用的茎环引物。请教，逆转录的时候，是将4种逆转录引物混合在一起，还是单管逆转录？混合逆转录，之前做预实验的时候，与单管相比差了2-3个CT。但是单管的话，会不会因为每管的逆转录效率不同，荧光PCR时，待测 miRNA和内参失去了可比性？另外，如果可以用混合逆转录的话，有没有什么逆转录酶或者盒子推荐？万分感谢！超马 单管 ...

wuxinkaoyan 大家好：　我有几个关于实验的问题向您请教下！希望您给予指导！谢谢！１、简单介绍下我现在要做的实验，我们用的是micrRNA，序列如下：microRNA-15-a: 5'-UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG-3'microRNA-16-1: 5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3’按照文献上说的，为了增强稳定性，我们合成了其互补链，做转染的时候用的是双链，转染到细胞质后，其会自动降解成单链，然 ...

refrigritor2005 弱弱地问：所有的mRNA都在细胞浆里吗？即使其翻译（？）的蛋白质位于细胞核内？woxingwosu mRNA本身应该是在细胞核中合成的（少量在线粒体中），成熟后才转运到细胞浆（cytoplasm）里面去，所以说不可能所有的mRNA都在细胞浆里面。而且真核的mRNA必须通过核孔转运到细胞浆并且在细胞浆才能进行翻译。翻译的蛋白质能在细胞核中有一部分是由于这个蛋白质含有核定位序列（NLS, nucl ...

taijiwu 给一个靶基因，经证实已发现有一种及其以上的miRNA可以调控此靶基因，如何根据这几种miRNA及其靶基因来删选新的miRNA!以减少假阳性率！纠结中，还请高人帮忙！woxingwosu 如果不多的话，就一个个试？taijiwu 二楼的方法不好，一个一个试得花多长时间啊，等找到相关的miRNAb别人可能文章都出几篇了，况且还浪费那么多的资金!不可取LoftyMan LZ有毛病？二楼的方法是截至现在唯一实用的方法， ...

taijiwu 据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答路得自己走 taijiwu wrote:据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答路得自己走 taijiwu wrote:据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答不知是否 ...

taijiwu 给一个miRNA极其序列，如何查找它的转录起始位置，存在于哪个基因片段的内含子区域。请高人指点。霍一刀hxs taijiwu wrote:给一个miRNA极其序列，如何查找它的转录起始位置，存在于哪个基因片段的内含子区域。请高人指点。这两个网址。http://www.mirbase.org/http://biochemistry.dxy.cn/bbs/topic/15429796?tpg=1&age=0taijiwu 能否介 ...

taijiwu 我测了一段miRNA的种子序列，如何查找它存在于哪一段基因的区域内，BLAST、miRBase、TargeScan如何使用，还请各位战友提供帮助。谢谢！woxingwosu 有了目的序列后这个我想BLAST应该可以出来了吧。具体做法你自己摸索估计比让人在网上教更快。当然什么具体问题可以提出来。mirbase和targetscan也是一样。下面的连接是NCBI的中文教程，希望对你有所帮助。http://bi ...

豪斯 请问版内高手一个问题，目前有哪些机制可以在上游调节miR，有没有相关的文献，谢谢LoftyMan 基本的就是RNA polymerase II吧，其他的一开始分为cellular和viral好学习一些这么火爆的话题，在Nature搜索一下microRNA的Review就行了，08年Bryan R. Cullen有一篇，最近他又有一篇新的所谓上游的调控，这个问题我觉得可能比发现miRNA的新target更难，建议楼主暂时不要考 ...

凉石榴 譬如说 hsa-mir-196 这个hsa是什么意思呢 ？woxingwosu 呵呵，这个应该是代表物种吧。 hsa代表Homo sapiens （人）。zjubell 凉石榴 wrote:譬如说 hsa-mir-196 这个hsa是什么意思呢 ？贴一下常用的脊椎动物的：另附一份所有的Homo sapiens (human) hsaPan troglodytes (chimpanzee) ptrMacaca mulatta (rhesus monkey) mccMus musculus (mouse) m ...

xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。zhujoker 首先请你珍惜你的标本，还有就是一个问题，一般我们所谓的血指的是血清样本，建议血液立即处理，因为不处理的话会出现以下几种情况：1，溶血；2，RNA的降 ...

xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。北京rnai 前一段时间提过全血，是用tirzol提的，但是效果不是很好，一种方法是采血后直接-80冻存，提的时候加trizol另外一种是用淋巴分离液分离后提的，效 ...

xcydcg 各位大虾：本人近期想做miroRNA方面的试验，想请教各位哪些公司做这方面比较强，北京有没有，还有，大家觉得芯片哪些比较好呢？谢谢各位了:)版主freecell留言:当然是ABI的较好一些，自己搜搜就能找到的啊！或者找个销售员问问就清楚了吧！xujian2004265 你是做哪方面的？xcydcg 好，谢谢各位了。我主要想代理一个公司帮忙做有关miRNA的东西，所以想看看各位有没有什么经验，哪家公司做的比较好。h ...

newchaoren race 怎么做啊woxingwosu 下面是wiki的介绍资料，我想你可以参考一下。另外两个protocol给你看看，不过条件需要自己摸索的哦。RACE, or Rapid Amplification of cDNA Ends, is a technique used in molecular biology to obtain the full length sequence of an RNA transcript found within a cell. RACE results in the producti ...

三叶虫 站友们，你们好：我们准备通过RNAi技术使成骨细胞的雌激素受体不表达（或表达减少）。由于从来没有做过这方面的实验，希望各位站友能简单给我们讲述这个过程，哪些是要请公司做的，哪些需要自己操作。需要什么特别的实验设备仪器。据个人了解：1，制备一种东西，能切除特定的基因。（如何制备？如何设置阳性和阴性对照？）2，这种东西作用于细胞。（使用什么方法？）3，检测细胞的基因是否有变化（设立通过PCR,WB等。）4，还有什么其他的方法， ...