• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】请教给位站友,通过RNAi技术使基因不表达。希望各位站友多多帮忙。

        丁香园论坛

        1959
        站友们,你们好:
        我们准备通过RNAi技术使成骨细胞的雌激素受体不表达(或表达减少)。由于从来没有做过这方面的实验,希望各位站友能简单给我们讲述这个过程,哪些是要请公司做的,哪些需要自己操作。需要什么特别的实验设备仪器。
        据个人了解:
        1,制备一种东西,能切除特定的基因。(如何制备?如何设置阳性和阴性对照?)

        2,这种东西作用于细胞。(使用什么方法?)

        3,检测细胞的基因是否有变化(设立通过PCR,WB等。)

        4,还有什么其他的方法,可以使细胞的特定基因沉默?

        祝:各位站友生活快乐,工作顺利。

        附:RNAi(RNA干扰)技术通过双链RNA(dsRNA)引发转录后沉默,产生RNAi现象。该技术具有
        高度的序列专一性,可使特定基因不表达,比反义RNA技术和同源共抑制更有效,更容易产生功能丧失或降低突变,目前已经成功地对上百种哺乳动物细胞目的基因进行功能分析,从而成为一种抑制体细胞功能基因翻译表达的有效工具。
        我想问你一个问题,那就是成骨细胞的雌激素受体被knockdown之后细胞还能生存吗?如果行的话随便找个公司都能做好。这个不是很难的实验。
        You want to have animal knock out or cell line? Virus transfection (Phoenix retroviral) would be fine
        1 你可以利用invitrogen网站上的在线设计软件设计siRNA分子,将设计的序列送给合成公司合成
        2 可以将合成的siRNA通过脂质体包裹转染如细胞内
        3 通过RT-PCR和Wb检测目的基因mRNA和蛋白的表达情况
        4 miRNA也可以,基因直接敲掉也可以
        你可以看看WWW.BIOENW.COM,在这方面我们做的很多。jianxu@bioenw.com
        RNAI干扰实验
        1.干扰序列
        可以选择文献 在线设计软件 公司设计等方式
        2.目的基因表达水平验证
        干扰之前 看一下目的基因的表达水平 如果比较高则可以进行干扰实验
        3.成骨细胞是否是原代细胞?
        通过细胞转染情况 选择三种干扰方式
        A 化学合成
        B。质粒
        C。病毒等介导
        4.验证靶点的有效性
        目的细胞中验证有效性,先可以WB,毕竟干扰的目的是使蛋白减少的。但是有可能出不来结果。这个时候也未必是干扰序列无效。请用realtime验证。或者两则同时做。
        5.干扰后表型
        这个不知道了
        你好!我们公司可以帮你做,有意请加QQ:594051497
        版主dnazyme留言:
        多次发广告,再见到,一定扣分处理。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序