RNA实验技术

yuanxinke 请问MicroRNA前体和mimic试剂盒有什么区别吗，现在国际上主流是使用哪种？谢谢！zhujoker 效果都是一样的，都是瞬转后能够表达成熟的miRNA。至于哪个是主流，这个就要看你的实验具体而言了，有的miRNA的mimic工作效果不好，所以有瞬转的前体了。仅供参考！路得自己走 跟着版主，再回一条！我们实验室做过mimics和基于质粒过表达miRNA前体序列，个人比较喜欢后者（还不知道是否可以转染 ...

myskite miR在宿主基因中表达方向有正有反，那么，构建表达载体（miR前体）的时候，方向的正反有关系吗？吴佰霖 miR在"宿主基因"中表达方向 相同的话，这个miRNA与宿主基因一起转录，很可能共用同一个promotermiR在"宿主基因"中表达方向 相反的话，个人认为这个宿主基因不是该miRNA的宿主基因，是重叠基因，这个miRNA也就成为一个反义RNAmyskite 看过文献，miR在"宿主基因"中表达方向 相同的话，这个mi ...

biophysics hsa-miR-3155 is not in our miRNA database.targetscan 5.1新收录的在哪个库可以预测靶基因？freecell 网上预测工具很多，你只有逐个去验证了。http://www.exiqon.com/microrna-target-predictionhttp://www.ncrna.org/KnowledgeBase/link-database/mirna_target_databasebi ...

zqooo 试验中涉及检测某microRNA在组织和细胞中的表达，参照文献第一步须将microRNA逆转录为cDNA,常用microRNA特异的stem-loop引物，如果参考文献由公司合成microRNA特异引物（线性），这种引物是在逆转录试验中自动形成stem-loop，再和microRNA结合，还是在逆转录实验前需要将特异引物转为stem-loop,请战友指教，谢谢。zhujoker 请参阅下帖：http://www ...

gaoyongxin 如何给提取的RNA加A尾（poly A）zjubell 先问一下，你有何目的？如果是真核的，提的RNA，一般都带polyA，如果是原核的，那你要加A做什么？gaoyongxin 我提的是血清的RNA 但是后期要做microRNA的qRT-PCRzhujoker 请参考下面这篇文献：PNAS published ahead of print July 30, 2008,doi:10.1073/pnas.0804549105Circulating m ...

lyc_urology 本人研一，需要做下调肿瘤细胞系中某一miRNA,并检测下游蛋白变化。但是用什么方法能特异有效地降低某一miRNA呢？Antagomir能用于细胞系研究吗？它与inhibitor比较哪个效果较好啊？除此之外还有什么其他方法吗？下调成功后，还想做MTT,流式细胞仪检测细胞周期，细胞克隆实验等，我应该选什么方法下调目标miRNA呢？恳请前辈赐教啊！Victor001 Ambion antisense inhi ...

佳杰宝贝 各位老师，我现在做sirna转染细胞，有个问题一直很迷惑，我查资料说脂质体2000转染4-6h后可换成含血清培养基，不影响转染效率，但是换液之后的新长出来的细胞里也含有sirna吗？kikie 该转染的能转染的已经转染了，所以换液没影响。firebaby2007 新细胞里没有，换液只是调整转染后细胞的生长状态，避免对细胞的伤害。happydong 细胞版正在进行siRNA转染答疑，可以去看看：http://cell.dx ...

yx4122004 对U87细胞，进行某基因的RNAi，效果非常差。U87细胞转染其他质粒则可以，不存在转染效率的问题。而同一序列转染其他细胞，效果可以。可能原因是什么？freecell 转染试剂在不同细胞系上转染效率有所差异，这很正常。这和细胞表面所负电荷等很多因素相关，非一言可概之。song333 RNAi target efficiency is quite different in different cell lines. If this target site d ...

biophysics RT。在miRbase数据库里只能查到pre-miRNA与成熟miRNA序列，为什么没有pri-miRNA序列呢？pri-miRNA序列查找是不是在另一个数据库？zhujoker 请参阅下面一贴：http://biochemistry.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=15429796&sty=1&下次发帖前先搜搜！biophysics zhujoker主任,我的问题是如何查找pri ...

依然燃 一篇国外文献中提到，细胞的某种基因被siRNA后，此基因的表达水平仅暂时降低，随着细胞分裂的进行，水平会回升。是这样的吗？难道siRNA沉默不是永久性的吗？谢谢！freecell 如果是永久性的，那基因敲除的动物模型就没有用了。siRNA沉默的水平，根据基因性质，会维持或长或短，但是不是永久性的。xuezhishui 不单在细胞水平，就是体内也不可能是一劳永逸的！生命的复杂性就在于其弹性（始终处于平衡状态），这样才能保 ...

biophysics In contrast, the expression levels of homologues of the miR-17-92 cluster,including miR-18b and miR-363 within the miR-106a-363cluster (chromosome X) and miR-10b and miR-25 withinthe miR-106b-25 cluster (chromosome 7)这是我在文章上看到的一段话，miR-17-92 cluster的同源miRN ...

callmeroger 问一个比较基础的问题，可能比较弱智检测差异为何要在蛋白和mRNA水平两个进行？据我个人理解，mRNA最终也是要翻译成蛋白的，那样的话从蛋白水平检测不是最直接的吗？mRNA水平是不是多余了？zhujoker 如果你上课的时候认真一点就知道了有一种叫转录后加工，所以在蛋白水平和mRNA水平表达不可能完全一致的。LoftyMan 因为不懂生物学的各类人群一直以为Gene决定一切，其他的都是臣服于Ge ...

feichangkexue 请问一下确定miRNAs属于一个miRNA家族的依据是什么？有没有相关阐述的文献？谢谢！吴佰霖 序列 的相似度？freecell microRNA family classification is based on the Rfam database (check the original paper on Rfam: http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/full/31/1/439 ). The basic idea behind fa ...

fgh2005 文章修回编辑问肿瘤标本miRNA表达情况，我该怎么回答，还是补做实验。谢谢！（我只做细胞系相关实验）侠骨仁医 我觉得有两个办法：1。最好的办法当然是去找一些肿瘤组织和正常组织，检测miRNA，这样是最理想的。2。如果实在弄不到标本，你就引用别人的文献，说明此miRNA在肿瘤标本中的表达情况，并且说明你的实验主要是focus在basic research上面的，这样别人应该可以理解。霍一刀hxs fgh2005 wro ...

shmicy2001 请问各位战友，小弟现在想做关于某个基因缺失后引起的基因转录和表达方面改变的研究，我只知道：1.研究基因转录水平改变是检测其mRNA，最常用的是RT-PCR及荧光RT-PCR等方法,请问这方面有什么注意事项没有呢？2.检测其蛋白质:用的最多的应该是Western Blot吧...但是因为我的标本只有患者的血液，假如真的存在因为基因缺失造成的相应功能蛋白表达改变（如降低等），不知道血液中的蛋白量的检测该如 ...

lizzi 基因组dna文库和cdna文库在构建原理和用途上的主要区别是什么zhujoker cDNA文库以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时 ...

redsky 我在mirbase查到hsa-mir-34a的序列如下：hsa-mir-34a MI0000268GGCCAGCUGUGAGUGUUUCUUUGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUGUGAGCAAUAGUAAGGAAGCAAUCAGCAAGUAUACUGCCCUAGAAGUGCUGCACGUUGUGGGGCCC我在ensemble查hsa-mir-34a序列及其上游(5'端）10bp序列变成如下 ...

liuying6477 想做mirna的抑制和过表达，请问1.过表达是否直接转ssc-let-7c MI0002445 stem-loopUGUGUGCAUCCGGGUUGAGGUAGUAGGUUGUAUGGUUUAGAGUUACACCGUGGGAGUUAACUGUACAACCUUCUAGCUUUCCUUGGAGCACACU2.抑制表达是否是上个stem-loop序列的反义还是ssc-let-7c MIMAT000215 ...

霍一刀hxs 各位高手，有没有专业的网站，可以根据一段cDNA序列，预测一下它的UTR区的序列？多谢。freecell http://171.66.122.45/content/15/5/742.fullor tryhttp://www.google.com/#hl=en&source=hp&q=+utr+prediction&aq=f&aqi=g-m1&aql=&oq=&gs_rfai=&fp=bcdf8cbbf06dc4f霍一刀hxs 谢谢freece ...

s78293 求教各位老师：A基因被RNA干扰之后，B基因表达亦下调，说明A和B关系如何？或能提示其他什么？freecell 理论上说明B的mRNA水平直接受A调控。侠骨仁医 我个人觉得只能说明B基因可能和A基因有相关性，但是只通过简单的检测不能说明两者是直接关系还是间接关系，有可能是A基因直接作用于B基因，当然也可能A基因是通过C，D，E。。。等间接作用于B基因。lbqlxy 新手不理解二楼说的直接调控的意思是社么1 A蛋白直接 ...