DNA实验技术

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。二、 选择正确的酶不言而喻，选择的 ...

制备转化用的农杆菌菌液准备：1．灭菌 试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。3．步骤：共转化农杆菌：于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30 ...

一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 十二烷基肌酸钠( ...

制备转化用的农杆菌菌液准备：1．灭菌 试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。3．步骤：共转化农杆菌：于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30 ...

一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 十二烷基肌酸钠( ...

所周知，海藻由于富含多糖，DNA提取是一大难题，一下是本人在试验过程中收集的海藻DNA制备方法，经试验验证可行，现在贴出来，以觞众战友。一、可大量培养的海洋细菌1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中，5000r/m离心5分钟弃上清，菌体加入500μl水洗涤一次，5000r/m离心5分钟，弃上清，向菌体中加入200μl悬浮缓冲液。2、在200μl悬浮缓冲液中加人55℃Tirs饱和酚200μl和 ...

所周知，海藻由于富含多糖，DNA提取是一大难题，一下是本人在试验过程中收集的海藻DNA制备方法，经试验验证可行，现在贴出来，以觞众战友。一、可大量培养的海洋细菌1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中，5000r/m离心5分钟弃上清，菌体加入500μl水洗涤一次，5000r/m离心5分钟，弃上清，向菌体中加入200μl悬浮缓冲液。2、在200μl悬浮缓冲液中加人55℃Tirs饱和酚200μl和 ...

一、实验目的与原理DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。二、材料以方法1、 材料：培养菌体2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高 ...

一、实验目的与原理DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。二、材料以方法1、 材料：培养菌体2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高 ...

一、目的与原理限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR ⅠHind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。二、材料与试剂1．材料：λDNA2．仪器：离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪3．试剂EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNAT ...

一、目的与原理限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR ⅠHind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。二、材料与试剂1．材料：λDNA2．仪器：离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪3．试剂EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNAT ...

一、目的与原理DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。二、材料和方法1． 仪器离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器2 ...

一、目的与原理DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。二、材料和方法1． 仪器离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器2 ...

一、目的与原理当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。二、材料和方法1． 材料：大肠杆菌2． 仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3． 试剂LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴TFB：10Mm MES（pH6. ...

一、目的与原理当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。二、材料和方法1． 材料：大肠杆菌2． 仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3． 试剂LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴TFB：10Mm MES（pH6. ...

一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM M ...

一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM M ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g *55 mM MnCl2 ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g *55 mM MnCl2 ...