DNA实验技术

wj1989113 最近一直在做慢病毒载体，用的是第二代的三质粒系统，目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后，包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞，想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题：1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株，荧光都很亮，但是做PCR或者Western之后，加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。（条带都较亮）尤其是Western，几乎没有差异。2、感 ...

xiaoqin813 我打算做DNA甲基化的MSP，阳性对照（完全甲基化的DNA）可以通过SssI酶处理获得。但是阴性对照（完全未甲基化的DNA）大家一般是怎么获得的，现在有些公司卖这两种对照DNA。还有其他什么方法可以得到吗？谢谢大家指点。waterbeijing whole genome amplificationDoes anyone hear of 5-hydroxymehtylation? How to prepare 5-hydroxymeht ...

timt75 如题，我要检测一个基因的外显子中某段polyA(10）是否存在缺失突变，应该如何检测？测序是否合适？测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？后面的杂峰是杂合突变引起还是ployA本身检测引起？盼回复！谢谢！timt75 请帮忙！谢谢！zhujoker 最精确的还是应该是测序，“测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？”我想问问你你是否测过，再说在这种情况下你问专门的测序公司的技术支持不是更好解 ...

pollution_ocean 最近在筛选乳腺癌组织标本，发现了一个位点的突变，很是欣喜，结果查证后，发现原来是同义突变，不知道这样的同义突变在写文章或者是今后的研究当中是否还有意义呢？足下客 据我的了解，以前筛选与乳腺癌有关的SNP位点时，有一些同义突变的位点也是与癌症的发生显著相关的。但是这种情况不是很多。很大程度上要看运气了。bigbang_0_0 同义突变可能产生如下六种效应，其中的一种或几种可以用来解释患病机理：1 ...

dlh110 我构建了个microRNA的带GFP标签的质粒，不知道能不能与目的基因的3’UTR luciferase报告载体共转来检测luciferase的活性？bigbang_0_0 这个实验还要谨慎考虑一下，GFP的绿色荧光可能会干扰luciferase检测结果。另外你说的microRNA带GFP标签，你要保证两个东西都要有表达且保持活性，建议你最好把这两个东西构建成两个转录单位，由两个启动子分别起始两个东西的转 ...

lilyfisher 红色的是复制出的DNA，那么在后随链中的复制是不连续的，如“最后一个冈崎片段”所示，我想请教一下，是不是书上写错了，应该是5/呢，谢谢。slytjiaofei 书没有错，随从链最后复制完的是3’端，对于新合成的子链而言最后合成出的是5’端。lilyfisher 非常感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

lilyfisher 为什么叫做反向重复序列，我反着读没有读出什么规律，能不能指点一二？如铅笔所指。请问N指的是什么核苷酸，谢谢biolinkphilic 就是说双链DNA，从5‘端开始读序列是一样的。N指的是ATCG四者之一，不确定。lilyfisher 请问从5‘端开始读序列是一样的吗，我做出互补的另一条链AATANGTNT，不管是正着读还是反着读也是不一样啊，我哪里理解还不对。请指点下下，谢谢。lmnsmu 是4个反向重复 ...

zqm0815 新鲜全血离心去掉血浆后，剩下的血细胞可以保存起来以后用于提取DNA吗？如何保存，可以保存多长时间？谢谢！lide658 可以用于提取DNA，我们是放在-20保存的，放-80也可以，一般保存2-3年都可以提取基因组DNA。业精于勤荒于嬉 可以用来提取DNA，保存的时间可以是很长的，尤其是放到-80度冰箱中。也可以提取后保存，DNA降解很慢，比较容易保存。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

douermm 最近需要扩增质粒，RNAi用的。接大肠杆菌种用的LB培养基，看有的文章上写的配成PH=7.0的，有的写配成PH=7.5的，到底应该配成多少呢？还有，用买的比如麦康凯培养基，会不会比自己配的效果好？谢谢~！slytjiaofei ph7或7.5对大肠杆菌生长基本没有任何影响。douermm 谢谢楼上~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个 ...

2012hunanjob 在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~2012hunanjob 顶，有没有人 ...

2012hunanjob 在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~2012hunanjob 顶，有没有人 ...

viola2010 您好，我是新手，pten (loxp/loxp)中loxp是什么意思？Fsp-cre中cre什么意思啊？谢谢woxingwosu 是基因敲除的一种手段。基本原理可见http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/CreLoxP.htmlviola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好 ...

zxmgugl 最近在查某个基因的启动子区CpG岛，发现一个问题：在一个CpG finder的软件上，如果输入的是这个基因第一个外显子第一个碱基的上游序列，能反馈出一段CpG岛（虽然长度只有50多bp，这点也很奇怪，因为这个在线软件的CpG岛界定标准就是长度大于200bp）；如果输入的是这个基因第一个外显子序列内第一个出现的ATG序列的上游序列的话，软件又分析出一段除了前面那个CpG岛，一段更长的CpG岛。所以，就有 ...

liuhp2158 如题，阅读文献碰到illustrator gene，不得其解，请教，谢谢各位XDJM！woxingwosu 请提供一下上下文来参考一下~~liuhp2158 ....This relatively simple perturbation of the DNA methylation systemnot only mimicked the dietary effect of royal jelly on phenotypebut also changed the cytosine methyla ...

sophiebaby 样品是经过陈化的烟叶，比较干燥的，其表面有一定量的微生物，我需要提取这些微生物的总DNA经过buffer浸泡和摇1h左右，得到烟叶浸出液，然后双层纱布过滤，离心收集沉淀，进行常规的细菌基因组提取步骤就是裂解、抽提什么的，大致上按照文献所述。但是我死活提取不出来，nanodrop只有很低的浓度，跑电泳没有完整的条带。我的下一步是要扩增16s的，有一两次有基因组条带，但是PCR也没有出来。试剂盒公司 ...

viola2010 您好，请问mice bearing a β-catenin-responsive lacZ reporter gene 是什么意思？如何构建？zhujoker 就是老鼠带有β-catenin反应的一个lacZ报告基因，检测β-catenin的变化viola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

bobbymm 我在做hBrf1这个基因，目前是要构建4个质粒。步骤：1、PCR引物设计，加酶切位点，扩增产物2982+56bp，跑胶鉴定。2、PCR产物跑胶，回收，phenol,chloroform,NaAc+Ethanol提纯。老板说如果测浓度太浪费sample3、双酶切，体系100ul,两个酶分别为2ul。双酶切之后提纯。（已经双酶切PGL3-basic，酶切过的在LB平板上长出3个克隆，没有酶切过的载体则是一片一片的 ...

Drnw 在突变库中找到密码子aACC-CCC的突变，其中ACC前的a是代表什么呢？谢谢！！！！！zhujoker 能不能够将你的原始的东西拿出来看看？Drnw Codon number 都是从起始密码开始计算的吗？是不是还有从其它地方开始计算的？woxingwosu 一般都是从起始密码子看的吧？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

winniw214 小提的质粒（自己配的S1、S2和S3，不是试剂盒，但是师姐用过没问题的）结果质粒浓度很低。菌液是37度，250rpm摇了11h的，应该够浓。想问一下有没有什么改进的方法？另外，关于加过S1、S2和S3之后的操作（剧烈混匀、颠倒……），我查过问过有好多不同的说法。不知道亲们平时怎么做的，哪种效果比较好？谢谢qijilaile s1,s2,s3混匀后，上下颠倒几次，不宜太剧烈hualala321 手法是最重要的，溶液1 ...