DNA实验技术

反相离子键合相色谱仪种类有多种。1、按分离目的可分：实验室反相离子键合相色谱仪和工业反相离子键合相色谱仪。2、按使用范围可分：专用型反相离子键合相色谱仪和普通型反相离子键合相色谱仪。3、按分离规模可分：小型反相离子键合相色谱仪和大型反相离子键合相色谱仪。4、按作用可分：反相离子键合相定量色谱仪和反相离子键合相定性色谱仪。5、按结构可分：台式反相离子键合相色谱仪和落地式反相离子键合相色谱仪。6、按洗脱方式可分：反相离 ...

高效气相色谱仪氮磷检测器的主要缺点是随着使用时间增长，性能变差，最后响应极小，必须换新电离源。为了达到要求的响应值，可提高 NPD 加热电流，但使用一段时间后，响应值又逐渐降低，须再提高其加热电流，如此多次提高加热电流，以保持 NPD 的正常工作。响应值下降的一般规律是：使用初期下降速度快，后期下降速度慢。所以，为了避免换新电离源后基线漂移太大，通常在使用前要预老化。通常电离源的使用寿命在 1000 h 左右，陶瓷电离源寿命可达 2000 h 以上。电离 ...

高效气相色谱仪的氮磷检测器（NPD）又称热离子检测器、热离子发射检测器和碱火焰电离检测器等，对氮、磷化合物的检测灵敏度高，选择性强，线性范围宽。目前已成为测定含氮化合物最理想的气相色谱检测器，对含磷化合物的灵敏度也高于FPD。一、结构：NPD与FID结构相似，两者的差异是NPD在喷口与收集极之间有一个电离源。二、工作原理：NPD主要利用以下三个条件达到检测目的。1、氢火焰：氢火焰为有机物分子燃烧和碱盐的蒸发、化学离解 ...

高效液相色谱仪化学键合固定相的制备包括硅胶预处理、试剂与溶剂预处理、衍生化反应和端基封尾等。一、硅胶预处理：1、酸处理：用0.1mol/L的盐酸在90℃下浸泡24h，或以10%的盐酸在回流状态处理8h。2、中和：水洗至无Clˉ，经酸处理后的硅胶表面的羟基浓度已达到理论值8μmol/m2左右。3、干燥：在200℃以下真空烘干除去物理吸附水，注意不得超过200℃，否则，硅醇基会脱水形成硅氧烷。二、试剂与溶剂预处理：1、硅烷化试剂 ...

高效液相色谱仪化学键合固定相是利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一、牢固的单分子液膜。一、化学键合固定相的类型：1、按化学键合固定相的表面结构可分：单分子化学键合固定相和聚合化学键合固定相。2、按键合有机硅烷的官能团可分：极性化学键合固定相、非极性化学键合固定相和离子交换化学键合固定相。二、化学键合固定相的优点：1、与液液分配色谱相比，使用过程中固定相不流失，耐溶剂冲洗。2、与液固吸附色谱相比，消除了载体 ...

研究背景：基因芯片可以通过探针和荧光标记对某个时间点生物体的全部基因表达量进行检测，探针代表的基因荧光强度通过仪器转换成基本数据。这些数据的背后隐藏着很多的生物学意义，这就需要我们通过生物信息学的方法去分析和挖掘。不同实验设计方案产生的海量芯片数据，其分析方法和思路都大同小异，这里分享一个多组实验设计的乳腺癌侵袭性研究芯片数据分析方法。实验设计：主要通过芯片数据筛选与乳腺癌侵袭性相关的基因和分子生物通路来 ...

多少人因为一句“21 世纪是生命科学的世纪”而进入这个领域。不管您在这条漫漫科研路上的感悟如何，生物学是 21 世纪最活跃的学科已然是不争的事实。竞争激烈也是不可否认的现状。现在发好文章不仅要好的idea，领先的技术，更需要得心应手的好工具。所谓工欲善其事必先利其器，今天为大家介绍德国 ibidi 的 ibipore （ 图 1）,一款可用于实时观察流动、剪切力条件下的细胞侵袭、迁移以及细胞相互作用的可视化的“ transwell ”，更多应用见 图 2。图 1. ibip ...

woshizhixiaofei 如题，谢谢大家song333 cut the part containing the plasmid, put in water (small volume if possible), then transformation using the water (containing plasmid).fengye_liu cut the part containing the plasmid, put in water (small volume if possible), then transformation using ...

lope 请教各位大侠：购买的UPSTATE的TOPFLASH/FOPFLASH质粒，准备做双荧光素酶报告基因检测，看文献上都只是用这个质粒和Renilla的载体共转染细胞，是否这个质粒本身就携带了Firefly萤光素酶呢？我看了说明书，只是说two full and one incomplete copy of the TCF binding site (mutated) followed by three copies in the reverse orientation, upst ...

穿越之后叫小丫 新构建的质粒抽提后跑PCR能跑出我的目的条带，但是酶切验证时却没有我要的片段，我把扩增目的片段的引物和原始质粒做了比对并没有互补序列啊，这是什么情况呢？电泳图在附件中，请各位大侠帮忙解解惑啊！谢谢！济南基美 可能是引物中污染了模板或者是酶切不成功ylong12 看下你构建载体时的酶切时间 时间太长 易产生星活性 这样的话 你PCR结果没错 但是你就切不开了穿越之后叫小丫 济南基美 wrote:可能是引物中污染了模板或者是酶切不成 ...

liuruya 问别人要了个带GFP-tag（GFP-N2载体）的质粒，目的基因1.4kb，分子量约52kD，转染293T细胞能见荧光，WB杂不出来，设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag，仍然杂不出来WB。仔细检查过序列，不存在移码的问题，非常费解。有同学分析是空间位阻问题，不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么，或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢！！！zhuqueleee ...

dengjie19841217 大家能不能帮我看看这张质粒双酶切的电泳图，上方边缘怎么会这么毛糙，本来是要切胶纯化后作插入目的片段的，怕会影响后面的连接，所以没纯化！已经出现两次同样的状况了，之前做的时候都还是很干净的一条带，不知道是怎么回事啊！载体是pGL3-Basic，酶切位点Mlu I和Xho I，酶切2小时后，1%琼脂糖凝胶电泳，80v电压45min。大家快来帮帮我吧falan87 我最近也在做双酶切连接，做了好几次都出 ...

sun1123moon 我现在做的是真菌DNA提取，后面用来做PCR的模板，用的是生工的提取盒。今天刚刚做了，不知道做的对不对？最后出来的是一点点像白色沉淀似的东西，然后我用TE缓冲液溶解，但是不知道怎么样属于溶解好了。而且如何测定DNA的浓度呢？我用的是液体培养基，但是不知道怎样把菌丝取出来，想请教一下各位，怎样在液体培养基上取出菌丝？Mostino 真菌DNA的溶解和浓度测定应该与质粒一样道理。高速离心或滤膜过滤可 ...

tianlicaas 各位高手：本人想在蓝藻中做一个看家基因的定点突变（Site-Directed Mutagenesis），也就是说，用体外合成的点突变后的看家基因替换基因组上的原始基因，在这里请教大家了！爱在进行时 找到的资料实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不 ...

soarmlxq 有个同学问我，DNA为什么是双螺旋的？它靠什么来形成双螺旋？我告诉他书上说是碱基堆积力。可是这么回答总觉得不够具体。碱基堆积力究竟是怎样的一种力呢？简单的碱基堆积力就能形成双螺旋结构吗？而且脱氧核苷酸本身也不是平面的，它立体的分子构造是不是也对它形成双螺旋结构有帮助呢？另外，如果存在满足以上条件的其他分子双链是否也会形成双螺旋结构？请各位高人帮忙给我一个更确切的答案！谢谢！nono1986 为什么是 ...

橙子童鞋 希望园子里做过DNA提取的战友们积极回帖啊，比如说一些提取过程容易出错的地方，需要特别注意的地方，很难搞定的步骤等。因为下个礼拜要做这个，头一次，希望大家讨论一下我做的时候可以借鉴。谢谢啦！lairena 你提的是什么的DNA，打算用什么方法啊？是自己配置的试剂还是商品化的提取试剂？duguke2004 去蛋白质，蛋疼的步骤！呵呵qingdaomdbio DEPC很重要啊，要选质量好的，其他的试剂耗材也要选用质量好的， ...

zhangyuxianggx 各位大侠好！现有pcDNA3-mCherry和pGEM-hgene两个东西在滤纸上，老师就说让构建载体，具体是什么意思啊？我理解的是一个真核表达载体和构建好的pGEM质粒，但是不知下一步该怎么做？恳请各位好心的大侠指点一二。shylook 直接插入cDNA吧zhangyuxianggx 那个pGEM就是已经插入了DNA的载体。请问这两个东西溶下来以后要怎么保存zjubell 剪下来。TE融解，再 ...

wangch84 各位高手，兄弟最近忙于质粒构建，意图将一段长约4000 bp的片段，通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下：1. 通过LA Taq酶扩增，并纯化回收目的片段（引物中带有酶切位点，保护性碱基＝3，上游带有Kozak序列）；由于回收效率很高，所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段，H2O 20 μl，10 X K BUFFER 4 μl，两种酶各2 μl，37℃作用过夜（12-14 h），再进行胶回收。2. 载体pc ...

hhjiangh 如何在数据库中查找到一个基因的所有致病突变位点？gikuaile 我也有相同的问题拂风 hhjiangh wrote:如何在数据库中查找到一个基因的所有致病突变位点？渴求、、、谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

cindyly267 最近在构建一个克隆，两个多月了都还没成功。具体情况如下：使用的是promega公司的Halotag载体，约3900kb。片段约500kb。酶切位点是SgfI 和 BamHI。之前用别人连了片段的载体酶切后再做载体的，无论怎么切都是自连。这次使用了公司的原始载体（带致死基因），片段也是从T载上切下来的，所以感觉载体和片段都切的没问题了，结果一个都没长（可能有自连的但是死了）。引物，酶切位点什么的都检查过了没 ...