DNA实验技术

免疫组化、Western、ELISA，免疫学三大工具，分别用于定位，定性和定量。 IHC(免疫组化Immunohistochemistry)是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等)，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核 ...

在Lateral Flow Diagnostic这个领域内,感觉大家的思路太窄了,给出一点新的思路大家参考,主要是用这个模型来测DNA和化学发光等东西.抛砖勾引玉:) 希望对于这个模型的应用有更多新的思路产生.FROM IVD.Present and future applications of gold in rapid assaysWhile stability, sensitivity, and bulk reproducibility still make gold colloid an ...

对一些DNA提取方法的总结细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiCl4.DEPC-water（抑制RNA酶活性）5. 3M NaAc (pH5.2)6. 96% 乙醇7. 70% 乙醇步骤：1.抽提缓冲液65℃预热；2. 加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min；3. 加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡 ...

DNA定量方法http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=545030&sty=1&tpg=6&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=485501&sty=1&tpg=26&age=0真核细胞DNA的制备与定量http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=455281&sty=1&tpg=31&age=0大量组织样品病 ...

我在这个版面看到很多贴子都是求助寻找基因序列的。觉得这是个普遍的问题。其实这个很简单，大家应该学会使用LocusLink。随着genome sequence的完成，大家研究的基因序列基本上都已经知道了。如何才能找到自己的基因序列哪? 去NCBI的LocusLink:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink/1.这是个功能非常强大的搜索工具。所有NCBI有的基因基本都连到了LocusLink。 ...

DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范围内,说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染,比如酒精未充分挥发我要纠正一下，纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯 ...

做了好多DNA提取保存，吃了很多亏给大家点建议吧：（有疑问可以回帖，有时间我会回答如果我知道） 血液保存：EDTA抗凝最好，肝素也可以不过经常会影响后续试验，一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少，再长时间我也没有试过，注意解冻一次大概损失20%左右（提取感觉估计得到的可能不准），放的时间长也会降解一些。4°做好不要太长3天我是试过没有问题再长不知道了血凝块就算了吧太难了结果不 ...

总结了测序中经常遇到的问题及原因分析，希望对大家有帮助！Q:测序结果中为什么找不到引物序列?A:找不到用来测序的引物，这是正常的，因为测序的方法是荧光标记测序法，仪器通过检测 ddNTP 上的荧光来读取所测序列，而引物本身是不被标记的，所以仪器无法检测到；找不到所测片段的扩增引物，这种情况是因为您所采用的酶切位点离所用的测序引物距离太近，一般荧光燃料会干扰几十个碱基的读取，这部分碱基会损失掉，损失掉的序列很可能就包含引 ...

为了突破0，今天上来贡献点，小生最近在做分子标记的分析，用popgene做种群的聚类分析，想必做过popgene的都知道分析挺简单的，就是popgene文件要求的格式输入比较严重，有一点不对，就算不了，闲言少述，下面我将自己的经验全盘奉上：1.dominant Marker例如:AFLP、ISSR、RAPD这些标记都属于此类，在数据输入中，表头的格式都是固定的，如：/AFLP_dipiolad_populationundefined/numb ...

用的是clontech的kit.3.2.2.1cDNA第一链的合成1)在0.5ml经DEPC处理过的离心管中分别加入tester和driver的mtRNA各2ug，然后加入1ul(10uM) 随机引物(9mer)，70℃温浴2min,然后迅速置于冰上放置2min，然后在每管中加入如下混合物：5×First-strand Buffer 2uldNTPs Mix(10mM) 1ulsterile H2O 1ulAMV Reverse Transcripta ...

找到一个好东东，与大家分享真核细胞DNA的制备与定量制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随 ...

NA序列分析技术是现代生命科学研究的核心技术之一，而双脱氧核苷酸链终止法(Sanger法)是目前使用最普遍的DNA序列分析技术。在基于Sanger法的全自动DNA测序技术中，测序反应产生的DNA片段是荧光标记的，这些片段经过平板胶电泳或毛细管电泳得到分离，荧光分子被激发而发光，发出的光信号被检测系统检测。Sanger法的优势在于可以分析未知DNA的序列，且单向反应的读序能力较长，目前的技术可以达到1000b ...

CDNA第一条链的合成 （20微升体系）一、按以下顺序加样于500微升EP管中1. RNA 5 UL2. Oligo Dt 1 UL3. dNTP 1 UL (浓度10mM)4. DEPC水 5UL (为试剂盒中配套的水)共12UL混匀离心——70℃水浴5分钟——冰浴2分钟（片刻）二、继续按以下顺序加样1. 5×BUFFER 4 UL2. 0.1MDTT 2UL3. RNase Ouundefined 1UL混匀——37℃ 2分钟三、再加M-MLundefined 1 UL共20UL 混匀37 60分钟——70℃ 15分钟四、CDNA 合成完毕，4℃冰箱保存“”标识为反应酶，需 ...

一 问题与解决大片段DNA的电泳问题一个含有8KB,16KB,20KBDNA的样品，需要跑琼脂糖电泳分离、鉴定和回收，请问：1、用0.5％的胶行不行？ 2、用什么样的MARKER，从哪里可以买到？1）最好用低熔点的胶了，但是回收的盒子可要选好的，片断太大了，回收的效率不高，0.5%的胶很嫩的,要小心。实在不行可以用0.7%的,30伏左右低电压,最好把电泳槽放在冰箱里,低温下电泳.这种大小的ＤＮＡ根本无需０．５％的凝胶，用１％即可。DNA ...

MLPA是一种高分辨率检测基因组序列中变异重复拷贝数的新方法，能检测到新的缺失和扩增， MPLA可以检测单一外显子的拷贝数的改变，能检测50～70个核苷酸的片断，操作只需要一台基因扩增仪和序列电泳系统。在相同的操作协议下MPLA有不同的应用。MPLA可以对上达40不同的mRNA进行相对定量检测，以测定启动子甲基化状态，并可检出已知的突变和SNPs。因为探针具有非常短的识别序列MPLA可以用于局部降解的DNA，比 ...

定义：启动子是参与特定基因转录及其调控的DNA序列。包含核心启动子区域和调控区域。核心启动子区域产生基础水平的转录，调控区域能够对不同的环境条件作出应答，对基因的表达水平做出相应的调节。区域：启动子的范围非常大，可以包含转录起始位点上游2000bp，有些特定基因的转录区内部也存在着转录因子的结合位点，因此也属于启动子范围。这项搜寻要从UCSC基因组浏览器开始，网址为http://genome.ucsc.edu/。以 ...

因为以前只是用Trizol提取过培养细胞的RNA，加入氯仿后只需吹打即可，没有提全血RNA的经验。前几天要提全血拉，我看步骤说明里面，“加氯仿后剧烈震荡”，因为偶力气大，生怕把mRNA弄断了，就来了个不剧烈的震荡。跑完电泳一看，基因组DNA污染；RNA只见18S、28S条带，均模糊、断裂。我以为是Trizol过期了（上海生工产品），一边订新的，一边好奇，把全血改为400ul，把Trizol改为600ul（原来的量分别是2 ...

大家好，课题是结肠癌甲基化方面，我想先把DNA ,RNA和蛋白质提取出来保存，以下是我的初步方案，请大家不吝指教,谢谢哦！RNA 抽提1.匀浆处理将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%2.将匀浆样品在室温（15～30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3.每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。4. 4℃ 1200 ...

目的基因的亚克隆所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。一、试剂准备1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用） 5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶解，分装小瓶，15lbf/in2高 ...

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用 ...