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基因重组中的关键反应和机制讲解【图文并茂版】

相关专题 基因重组技术是想从事生命科学领域的同学不可不懂的关键技术之一,本文以图文并茂的形式展示了基因重组中的限制酶、载体、分子克隆、基因表达以及基因文库中的重要反应和机制。 重组DNA技术是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一。即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。 重组DNA技术(Recombinant DNA ...

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基因重组中涉及到的各种方法一览

相关专题 DNA重组是整个基因工程中的关键,其中所涉及到的主要反应,以及每个步骤中溶液的配制数据等不少,本文对其中的质粒提取鉴定、分子杂交、基因转移、DNA制备等实验方法作详细介绍。 一、质粒DNA的提取及鉴定 (一)质粒DNA的提取及鉴定 1.收获细菌 (1)将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中,接入一单菌 ...

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定量聚合酶链反应(Q

相关专题 PCR?PCR只是一个简单的不起眼玩艺 ——凯利·穆利斯(Kary Mullis) PCR只是一个概念,所发生的奇迹是:PCR概念变成了可操作的实验系统,变成了一项成熟的技术,后者又上升成为新的概念。 …它最大的特点就是能不断推出新形式。 —— 摘自: A Story of Biotec ...

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Reverse SAGE (rSAGE)

相关专题 Jian Yu ( Email: jianyu@jhmi.edu)Last edited on May 1 2000OverviewThis protocol was developed in Kinzler/Vogelstein laboratories to isolate cDNA fragments correspondin ...

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核酸分离与纯化的原理及方法

相关专题 核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综述。 核酸分离与纯化的原则 核酸在细胞中总是与各 ...

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限制性片段长度多态性RFLP

相关专题 随着对基因认识的不断深入,发现在同种生物的不同个体之间,尽管其蛋白质产物的结构和功能完全相同或仅存在着细微的差异,但在DNA水平却存在着差异,尤其在不编码蛋白质的区域以及没有重要调节功能的区域表现更为突出。这种不影响生物体表型的DNA突变被称为中性突变。 分子生物学技术的不断发展已使得从DNA水平直接分析这类突变成为可能。 目前应 ...

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Bacterial Transformation(细菌转化)

相关专题 IntroductionTransformation is a technique to introduce DNA into bacterial Cells. There are many variations on a common theme but the key points are listed below. Check ...

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DNA的限制性酶切及电泳分析

相关专题 实验目的:  1.掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。  2.掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。  3.掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。基本原理  限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶(水解磷酸二酯键)。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性,可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。通常所指的DNA限制性 ...

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大肠杆菌的转化及重组菌的筛选

相关专题 一、 实验目的学习和掌握转化大肠杆菌的通用方法,并进行转化子的筛选二、 实验原理转化(transformation)是将一种生物(供体)的遗传物质(通常为DNA)转入另一种生物(受体)并使其在受体中得以保存和繁殖的过程。大肠杆菌不是天然感受菌,在低温(0~5℃)环境下经CaCl2处理,细胞壁变松变软后能摄入外源DNA,这种状态称为感 ...

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核酸提取(The Extraction of Nucleic Acid)

相关专题 【实验目的】 1.掌握核酸提取的基本原理和基本方法 2.掌握检测核酸浓度及纯度的原理及方法 【实验原理】 DNA是遗传信息的载体是最重要的生物信息"生物信息分子是分子生物学研究的主要对象因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。如不能有效的完成DNA提取方面的工作,那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在 ...

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Mini

相关专题 IntroductionExtraction and purification of plasmid DNA from E.coli can be performed on a small scalewhere DNA is extracted from just 1-2 ml of bacterial culture (mini- ...

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DNA重组技术(Recombinant DNA)

相关专题 【实验目的】 1.掌握DNA重组技术的基本原理和基本方法 2.熟悉质粒DNA的小量制备及酶切鉴定方法 【实验原理】 1.DNA重组技术 重组DNA(Recombinant DNA)技术是遗传工程的核心技术,也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤: 1)重组DNA分子的构建:即将目的基因(DNA或c ...

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Subcloning: restriction enzyme digests, ligation

相关专题 IntroductionThe aim of this protocol is to describe the sub-cloning procedure Ð the techniques used to take a DNA fragment from one plasmid and transfer it to another. ...

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Transfection procedures

相关专题 IntroductionWe will express recombinant proteins in COS or HEK293 Cells Ð see table below for further details. COS (HEK293) cells will be provided at 50-70% confluency ...

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已知基因序列的获取策略——兼谈引物设计与序列分析

相关专题 引物设计专栏:http://ask.bbioo.com/special/experiment/PrimerDesign.htm一、如何获取已知目的基因的序列信息先查找其蛋白相关信息了解该基因编码产物的基本情况与功能(www.expasy.org)进一步查找其核酸相关序列信息,常用数据库:Genebank、EBI、DDBJ二、目的基因 ...

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Quantitative RT

相关专题 Please contact Center for Plant Genomics (CPG) facility manager Hailing Jin (hljin@iastate.edu) regarding questions or corrections.REVERSE TRANSCRIPTION1. Add 1 ng in ...

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Why is Real

相关专题 Real time PCR addresses the needs of high-throughput PCR and PCR applications requiring precision.Beta actin SYBR.Two groups of 36 replicates each.SDS MethodsFluoresce ...

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碱裂解法制备大肠杆菌质粒(Alkaline Lysis Plasmid Preparation from E.

相关专题 This protocol yields plasmid DNA that is suitable for restriction digests and cloning purposes. This preparation method works well on all E. coli strains and also expo ...

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Basic Bioinformatics

相关专题 Purpose of this protocol: From your literature reading you might find proteins from other model systems (for example mouse) that have known roles in apoptosis either u ...

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Amplifying DNA: PCR cell

相关专题 1.The importance of DNA cloning:Current DNA technology is based on two different approaches: a. Specific amplification (DNA cloning) which involves cell-based DNA clo ...

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