DNA实验技术

相关专题 6.1实验原理 DNA片段的分离与回收是基因工程操作中一项重要的技术，如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针，回收PCR产物用于再次鉴定等。理想的DNA片段回收方法应满足以下几个要求： （1）回收片段应有非常高的纯度 如从普通凝胶中分离出来的片段不可带有即使是微量的凝胶――凝胶会抑制大部分的酶活力，对于后续DNA片段用于再酶切 ...

相关专题 4.1 实验原理 4.1.1 DNA的连接策略 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆，从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段，然后体外使两者相连接，再用所得到重组质粒转化细菌，即可完成。 外源DNA片段和质 ...

相关专题 1. 操作步骤: 取鲜猪脾去脂、血称取10g用预冷的1×SSC溶液洗2次，剪碎。 按睥：1×SSC=1; 5W/V 加入50ml预冷的1×SSC，用高速组织捣碎机破碎8次每次5秒中间间隔30秒。 将匀浆液放在烧杯中， 于冰盐浴中冷却30分钟。4000转/分钟离心10分钟。充掉上清。沉淀物 ...

相关专题 一．实验目的：学习并了解叶盘法转基因烟草的技术流程。二. 实验原理：土壤中的农杆菌是一种革兰氏阴性菌，能够感染植物的受伤部位。农杆菌中有一种环形的Ti质粒，Ti质粒最重要的两个区域为T-DNA区和毒性区，T-DNA是Ti质粒上唯一能够整合到植物染色体上的序列，而毒性区上一系列则帮助T-DNA区整合到植物的染色体上。土壤农杆菌转化植物 ...

相关专题 【原理】 在构建重组DNA分子时，为了提高重组效率，载体DNA的酶切片段，特别是两种酶切的载体DNA片段、目的基因酶切的DNA片段等，都需要在酶切后进一步分离、纯化与回收。另外在检测重组DNA的分子杂交技术中，要制备DNA探针，也往往涉及要先分离回收DNA片段。 【操作】 1.酶切之后进行琼脂糖凝胶电泳泳毕后在紫外灯下检查目的片段 ...

相关专题 多聚集链反应（polymerase chain reactionPCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物 ...

相关专题 一、目的掌握DNA 体外重组技术中限制性核酸内切酶的酶切与连接方法。了解酶解反应与连接反应的条件及原理。二、原理（一）酶切反应原理1.核酸限制性内切酶能够专一识别DNA双链上某碱基顺序，如EcoRI酶的识别顺序为：若用EcoRI 酶切只有一个切点的环状双链DNA 分子，就能产生两个带有AATT 碱基顺序的粘性末端的线状DNA分子：若 ...

相关专题 一．实验目的通过本实验的学习，了解和掌握植物转基因技术的原理和方法，以及转基因植物的筛选和鉴定的基本过程。二．实验原理植物转基因技术(plant trasgenetic technology)是指把从动物、植物或微生物中分离到的目的基因，通过各种方法转移到植物基因组中，使之稳定遗传并赋予植物新的性状，如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等 ...

相关专题 【实验原理】 琼脂糖凝胶电泳与醋酸纤维素薄膜电泳原理基本相同，但兼有分子筛效应，从而使不同分子量大小的DNA片段分离。琼脂糖是从琼脂中提取出来的含有较多的酸根和羟基多糖。回收DNA的方法很多，主要包括DEAE纤维素纸插片电泳法、透析袋电泳洗脱法、槽沟电泳洗脱法、v形槽电泳洗脱法以及低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法。本实验采用琼脂糖凝胶DN ...

相关专题 【基本原理】 利用DNA连接酶把目的DNA片段和载体DNA连接在一起，成为一个新的重组分子。目的DNA片段被限制酶消化后其末端只可能有3种形式： （1）带有相同的粘性末端：用同一种酶或同尾酶处理可得这样的末端。由于质粒载体也必须用同样的酶消化，亦得两个相同的粘性末端，因此在连接反应中，外源目的基因片段和质粒载体DNA均可能发生自身环 ...

相关专题 实验原理质粒（Plasmid）是一种双链的共价闭环状的DNA分子，它是染色体外能够稳定遗传的因子。质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主的进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。目前，质粒已广泛的用作基因工程中目的基因地运载工具—载体。从大肠杆菌中提取质粒DNA，是一种分子生物学最基本的方法。质粒DNA分离纯化方法有 ...

相关专题 自1985年英国遗传学家Alec Jeffreys建立DNA指纹技术以来，经过近20年的发展，法医DNA分析先后已建立了DNA指纹技术，PCR扩增片段长度多态性分析技术、线粒体DNA测序和DNA蕊片等主要技术，结合其它一些新的技术方法，如MVR-PCR，PCR-SSO，SSP-PCR、DHLPC、TOMEF等，共同形成了现代法医DN ...

相关专题 PCR扩增反应完成之后，必须通过严格的鉴定，才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法，能判断产物的大小，有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，前者主要用于DNA片段大于100bp者，后者主要用来检测小片段DNA。 1．琼脂糖凝胶电泳 这是实验室最常用 ...

相关专题 免疫-PCR技术结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高敏感性，是一种极为敏感的抗原检测技术，并适合于各种微量抗原的检测。　　荧光标记、酶标记和放射性同位素标记这三大抗体标记技术是目前免疫化学、免疫学以及分子生物学中应用最广的常规抗原检测手段，具有很高的灵敏度。但在早期癌抗原及某些神经肽等极微量抗原检测上，荧光标记及酶标记技术还缺乏足 ...

相关专题 质粒 一.质粒DNA含量 质粒名称 质粒大小 拷贝数 DNA含量（每ml） PGEM PUC PBR322 2700bp ...

相关专题 摘 要采用紫外、荧光光谱的分析方法，研究了苯甲酸钠与小牛胸腺DNA的体外相互作用。实验结果没有发现苯甲酸钠和DNA之间存在能够明显影响两者各自的紫外光谱或荧光发射光谱性质的相互作用。表明在体外苯甲酸钠未对DNA的构象有明显的影响，也未对DNA中各种碱基有明显作用。关键词：DNA 苯甲酸钠 紫外光谱 荧光光谱 AbstractRese ...

相关专题 一、实验目的：学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。二、实验原理:要获得纯的DNA样品，必须考虑以下几点：¾如何选材，如何破碎组织细胞？¾如何除去蛋白质？在真核细胞内，DNA与蛋白质结合成核蛋白的形式存在。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除去蛋白质。¾设法除去RNA的污染；¾防止DNA酶的降解作用；(一)选材要提取 ...

相关专题 目的 对于许多重组DNA的实验，知道DNA的序列常是进一步操作所必备的。 本实验将定出你所选殖之cDNA的序列，并进行数据库比对分析。其目的在教导学生如何从事DNA定序分析及DNA序列的计算机分析。 原理 本实验所使用之方法为F. Sanger所发展之dideoxy定序法。 此法乃是将一引子黏合到欲定序之DNA模板上，再利用DNA聚 ...

相关专题 实验原理 利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。实验材料: 新鲜植物叶片1.取4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状（越细越好）。2.转移至50ml离心管中，加入16ml ...

相关专题 （一）原理 组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为250~270nm之间。核酸的最大吸收波长是260nm，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。 在波长260nm紫外线下，1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA或RNA为20μg/ml。可以次来计算核酸样品的浓度。 分光光 ...