DNA实验技术

tianjiaoya 小弟最近要构建一个质粒，需要用到Gal4转录因子，有哪位大侠知道Gal4的UAS在那个质粒上？最好是容易买到的质粒啊，我查了好多质粒，都很难买到。或者能把Gal4的UAS的序列告诉我，这个上游激活序列应该不大，我可以去直接人工合成，然后参照别人那些构建成功的质粒的样子，把UAS插入到我的质粒中去，谢谢各位大侠了！！！song333 GAL4/UAS systemThe GAL4-UAS ectopic expres ...

kelizi 哪位大侠知道RET原癌基因的结构域，其相应的定位、功能？以及相应蛋白在细胞的定位及功能？如何调节？谢谢！如果有相应的文献资料更佳woxingwosu http://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=RET&search=ret应该比较全了，你在从里面的链接可以找到更多~~kelizi 非常感谢！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

keimon 要对MUT基因缺失的病进行检查，检测对象是个携带者，怀疑是大片段DNA缺失，求大片段外显子缺失的检查方法？ :Dwoxingwosu 呵呵，虽然不熟悉，我也来说说看法。是否可以通过PCR基因组来判断呢？设计一对引物，其中一个引物要在这个大片段上面，然后从对象提取基因组，做PCR，再与正常的基因组比较得到差异？或者是通过提RNA,RT-PCR,最后在用这一对引物去检测与正常的差别？或者干脆做western来检测蛋 ...

xin1027 如何将一个基因中的某个片段进行缺失呀？不知道用什么方法，具体怎么做？盼高手指点！！woxingwosu 你是希望什么缺失呀？直接从基因组上敲掉？还是在质粒上呀？能不能说清楚呀。。。xin1027 很多术语我不太清楚，就用个比方吧，假设说一段序列ATTGATCGAGGT，是PCR产物，需要将其中的ATCG除掉，只剩ATTGAGGT。这个应该怎么做。woxingwosu 呵呵，如果是这么少的碱基需要去掉，我想直接用点突变 ...

xxzjcg 急求OX40基因序列，在gene bank 里没有明确的OX40基因序列woxingwosu 根据你的基因，我查了一下NCBI，上面有多个OX40（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene?term=OX40），我列举了其中一个，TNFRSF4 tumor necrosis factor receptor superfamily, member 4 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/7293),其CD ...

花樱雨 :~)我用进口试剂盒提取人新鲜全血的DNA 放置-20℃保存了2天后 室温下解冻 进行琼脂糖凝胶电泳，结果做了几次都出下一下的情况：1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事？请高手指点我一下 不胜感激2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了以下附带我的电泳图zjubell 你的DNA提的没 ...

baiguo861029 各位前辈好 本人是个新手，听很多师兄师姐说丁香园很好，这儿的人都很热情帮助他人。我现在研究生在读，因为课题需要，急需购买这个质粒pBV889，试了好多方法都没找到。这个质粒含有人干扰素alpha-2b编码序列，即cDNA序列。非常希望知道的前辈给予我帮助，非常感谢！！woxingwosu 用google搜索了一下，发现很多文章都有，国内发表的也很多。其实你或者你老板可以写信去要一下就方便多了，还不用 ...

陆军鱼 小弟通过转化感受态扩增pGL-3 Basic、control，pRL-SV40三种购买来的质粒，小提后电泳检验一下扩增的成果，结果让我不太理解，为什么质粒大条带后面还有“杂带”呢？12道，34道，56道都是从一块板上挑的两个单克隆，两个道的质粒在相应的位置都有杂带感受态经抗生素板检验没有污染不知道这样的杂带怎么解释？woxingwosu 这个可能是正常的吧（除了3和4有点怪怪的以外，建议再重新跑胶或者重新提质粒看看） ...

silencemm1015 请问，我怎样才能知道TS,TP,MTHFR,DHFR这几个酶的基因突变频率？如何去查相关文献？在哪查？谢谢！woxingwosu 最好写的具体以一点吧。。。NCBI上查一查也应该能够搞定的，只要关键词搜索得当的话。silencemm1015 谢谢！但是查不到想要的东西woxingwosu 呵呵，NCBI上都查不到的话，估计就是还没有人做了。。。silencemm1015 可能还是关键词用的不当吧。我再查查看， ...

海之泪 有做过ChIP的高手不？我用冷泉港提供的protocol（http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2009/9/pdb.prot5279#R42）1. Add 27 μL of 37% formaldehyde per milliliter of cell culture (in growth medium on tissue culture plates or in tissue culture flasks) while slowly shaking the ce ...

师赠王老吉 在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？liushan8_9 白细胞或者红细胞的细胞膜应该是一样的吧。yyf87255300 在提取外周血DNA时，成熟的红细胞内没有核，所以裂解的外周血的白细胞，我们实验室用的裂解液是三蒸水zjubell 师赠王老吉 wrote:在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？看你这个词是出现在哪的。如果你 ...

qxxie215 这几天在做基因拼接，看的文章不多，但是发现这个拼接的linker有不同：（G4S）n和（S4G)n两种，哪位高手解释一下，这两个有什么区别？谢谢！zjubell 发现这么多天了回复仍然是0.主要是lz的问题根本很难看懂。什么叫基因拼接？是两个基因拼成假基因？重排？还是测序后的序列拼接？woxingwosu 最好还是把原始文献弄出来看看吧？（G4S）n和（S4G)n这两个东西连google都查不到呀。。。qxxie2 ...

sunside 各位前辈好！刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？非常感谢！！zhujoker MS-HRM方法 是一种新的定量检测甲基化的方法 ,它是基于亚硫酸盐对DNA进行修饰后具有不同的碱基构成,导致甲基化和非甲基化模板扩增后的产物热稳定性不同而进行检测zitong1983 sunside wrote:各位前辈好！刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？非常感谢！ ...

smu 各位战友：最近我在搜索一个真核基因的启动子区，然后在启动子区寻找一个转录因子的结合位点，我找了转录起始点的上游2000bp至转录起始点下游200bp，结果在转录起始点下游150bp附近看到一个结合位点，请问战友们：转录因子的结合位点可以在转录起始点下游吗？谢谢各位大侠！kinguangjun 转录因子的结合位点有些是在转录起始位点的下游smu 谢谢，一般下游多少范围呢？zitong1983 转录因子的结合位点可以在 ...

霍一刀hxs 是否有战友知道：如何查询一个基因内含子的5' splice site 和 3' splice site ？谢谢。woxingwosu 看看是否是这个？http://www.life.umd.edu/labs/mount/RNAinfo/consensus.html霍一刀hxs woxingwosu wrote:看看是否是这个？http://www.life.umd.edu/labs/mount/RNAinfo/consensus.html谢谢。祝科研顺利。 ...

shuru214004 如何查找一个基因的启动子和5端非翻译区，以及怎么确定+1的位置？我用UCSC和ensembl这两个网站找出来的非翻译区一致，+1的位置也找出来了，可是这个基因跟国外报道的+1位置却相差10-20个碱基左右。为什么呢？用这两个网站找出来的非翻译区可信度有多大？lmnsmu 启动子位于DNA序列上；5端非翻译区在mRNA序列上，目前明确的基因在各种核酸数据库中均标明CDS（编码序列）的位置，第一个CD ...

观天 如题，查找某种组织中特异性表达的全部基因，谢谢！超级风 用表达谱芯片就可以做了观天 谢谢，估计找现成的结果不一定有。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

sunside 请教一个问题。我查关于ALU、LINE-1基因甲基化的检测方法，好像没有用MSP的，国内做这两个基因的好像挺少。请问这两个基因甲基化可以用MSP检测吗？？？freecell 建议看看这篇文章： http://nar.oxfordjournals.org/content/32/3/e38.full或者搜索：http://www.google.com/search?source=ig&hl=en&rlz=&=&q=line-1+met ...

sunside 大家好，现在刚开始查这方面的资料。有很多疑问。想问一下做过或在做这方面研究的前辈，请多多指教。1.我想做血液样本的MSP，大概100个样本的话试剂大约需要多少费用？2.请教各位前辈，一般大家单纯做MSP的话，周期多长？因为快毕业了，所以担心较难的话，可能做不完。zjubell 这个不难的，完全可以自己做。你要测几个位点的甲基化，1个跟50个位点，价格肯定是不一样的。一.先提血液基因组DNA，建议用kit吧，bl ...

lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒，但是我不知道两种质粒间的比例是多少，有哪位前辈做过这方面实验的，请帮我指点一下，谢谢了xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL－TK（海蜃素荧光素酶）的荧光值要高一些，我转20ng/孔（24孔板），作为内参.pGL3（萤火虫荧光素酶）的荧光值低一些，我转0.4ug/孔（24孔板）然后0.4ug的调整质粒。这样的话，萤火虫荧 ...