• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】片段缺失

        丁香园论坛

        2234
        如何将一个基因中的某个片段进行缺失呀?不知道用什么方法,具体怎么做?盼高手指点!!
        你是希望什么缺失呀?直接从基因组上敲掉?还是在质粒上呀?能不能说清楚呀。。。
        很多术语我不太清楚,就用个比方吧,假设说一段序列ATTGATCGAGGT,是PCR产物,需要将其中的ATCG除掉,只剩ATTGAGGT。这个应该怎么做。
        呵呵,如果是这么少的碱基需要去掉,我想直接用点突变的方法就可以了,类似于Stratagene公司的点突变试剂盒做法。
        对,用点突变的方法,overlap PCR ,先分别扩缺失片段的前后两段,再将这两段overlap融合就可以了。前一个片段的下游引物的5'端要引入后一个片段的5'端序列的反向互补序列。后一个片段的上游引物5'端要引入前一个片段3'端的部分序列。这两个引物刚好是反向互补序列。
        哦,这样!这个方法是不是就叫重叠延伸PCR呀?我看了相关的叙述,但是还是不是很明白原理,也不知道这两个引物设计重合的片段需要多长?试验中有什么需要注意的相关事项?大侠有没有详细的资料能解释下?

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】片段缺失

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序