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全血DNA快速提取及其在HLA基因分型中的应用

王 薇1 邵超鹏21 乌鲁木齐市中心血站 8300002 深圳市血站 518020  摘要 本文重点介绍两种改良的小量DNA提取方法:快速酚-氯仿法和氯化钠(NaCl)盐析法,并分别采用新鲜全血和冰冻全血制备DNA,分析两种方法提取DNA的收获量和OD260/OD280比值以及方法本身的难易、耗时及费用等。结果显示酚-氯仿法简便快速,全过程不到30分钟,而NaCl盐析法DNA收获率高纯度高,且避 ...

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核酸电泳专题-电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的

50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼 ...

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限制性内切酶的一般原则和建议(General Guidelin

1. 如何做酶切反应? 该问题看似什么简单: DNA中加上酶,然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中,我们不断听到:切不动,装不上。问题在什么地方?能系列生产限制性内切酶的公司国际上,就那么几个,位列前3 的是NEB Fermentas SibEnzyme。这些公司提供酶的品质一般都能得到保证。您可以怀疑酶的质量问题,但是更多的问题来源于模板是否合适酶切要求。下面几点对你的酶切是有帮助的。 ...

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简单序列长度多态性(SSLP)和间简单序列重复(

简单序列长度多态性(simple sequence length polymorphism,SSLP)是据串联重复排列微卫星基序两侧的单一序列设计引物,对微卫星序列(microsatellite DNA或simple sequence repeats,SSR)进行扩增,由微卫星基序重复数目的变异而产生多态性。由于中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列,因而可以将微卫星侧翼的DNA ...

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胶回收的方法、注意事项以及实验步骤

   DNA片段的分离与回收是基因工程操作中一项重要的技术如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针回收PCR产物用于再次鉴定等。 (责任编辑:admin) ...

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酵母基因组DNA提取(Isolation of Yeast Genomic DNA)

  Amberg Lab Upstate Medical University DNA.html" Grow 100 ml culture to about 1x10 to the 8th Spin 4 x 15 mls of culture down about 3k x 3 min. Resuspend entire pool in about 6 mls ddH2O ...

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动物基因组DNA/RNA提取及含量测定

  目的要求 学习和掌握从动物组织中提取核酸的原理和操作技术了解提取DNA/RNA的几种方法,原理和优缺点学习测定DNA/RNA含量的基本原理及具体方法。实验原理核酸和蛋白质是构成生物有机体的主要成分;核酸是生命的最基本物质。在生物体中它们结合成核蛋白的形式存在。核酸按其化学组成可以分成两大类,一类含D-2-脱氧核糖的称为脱氧核糖核酸(DNA),主要存在于细胞核中;另一类含D-核糖的称为核糖核酸( ...

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如何从血块中提取DNA?

  一、操作步骤: 1.取15ml研磨器,加入5ml血块,4-5ml溶血试剂,研磨至无凝块存在。转移到50ml离心管中,2500rpm,10min。 2.去上清,假溶血试剂清洗一遍,2500rpm,10min,至无红色存在。 3.去上清,加1ml细胞裂解液,转移到离心管,加20mg/ml蛋白酶K 10ml,56℃水浴,3小时。 4.每管加1ml平衡酚,混匀,6000rpm,10min。 5.重复 ...

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DNA的定量分析

1.原理 DNA定量分析是DNA分子操作过程中一个必不可少的过程,常用的有两种方法。(1)紫外光谱分析法。核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键,260nm处有特异的紫外吸收峰,其吸收强度与核酸浓度成正比。核酸分子的单链、双链之间的转换,对光吸收水平有一定影响,但其偏差可用特定的公式进行校正。(2)EB荧光分析法。EB即溴化乙锭,它能插入DNA或RNA的碱基对平面之间并与 ...

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核酸序列预测分析的基本方法

核酸序列预测分析的基本思路:当我们得到一个DNA序列时,一般都需要对该片段进行分析,确定它的功能区域,寻找调控区域、编码区域,预测其编码蛋白,这些就是我们研究DNA序列的目的。核酸序列的预测就是在核酸序列中寻找基因,找出基因的位置及功能位点,以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中,确认一段DNA序列是一个基因需要有多个证据的支持:1、一般而言,在重复片段频繁出现的区域里,基因编码区和调控区不太可 ...

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Maxam-Gilbert 化学降解法

1977年, A.M. Maxam 和 W. Gilbert 首先建立了 DNA 片段序列的测定方法,其原理为:将一个 DNA 片段的 5' 端磷酸基作放射性标记,再分别采用不同的化学方法修饰和裂解特定碱基(表 6-1),从而产生一系列长度不一而 5' 端被标记的 DNA 片段,这些以特定碱基结尾的片段群通过凝胶电泳分离,再经放射线自显影,确定各片段末端碱基,从而得出目的 DNA ...

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斑马鱼胚胎DNA的制备

材料和试剂1. 蛋白酶K(罗氏03115836001)2. 1M的Tris,pH值8.33. 氯化钾4. 吐温20(10%,EMD4 biosciences,655207)5. NP40(10%,Merck,492018)设备1. PCR仪2. 离心机3. 孵化器步骤1.&nbs

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 作用于呼吸系统的药物-- 平喘药

网络 第三十章 作用于呼吸系统的药物   咳、痰、喘为呼吸系统疾病的常见症状。镇咳药(antitussives)、祛痰药(expectorants)和平喘药(antiasthmatic drugs)是呼吸系统疾病对症治疗的常用药物。 第一节 平喘药   喘息是支气管哮喘和喘息性支气管炎的主要症状。其基本病理变化是炎症细胞浸润,释放炎症介质,引起 ...

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实验室学习生活心得体会,如何壮大一个团队

在最初来到大学时,感觉一切都很陌生。新的生活环境,新的学习方式,身边新的同学朋友……没过多久,也渐渐习惯了大学,认识了大学。大学是一个开放的学堂,你可以学习你喜欢的东西,主动权掌握在我们自己的手中,而不是高中那种灌输式教育方式。 大学课余时间很多,也正是因为这个原因,有时候总感觉无所事事。其实当一个人无聊没有事做时,才是最累的。后来一个偶然的机会我进 ...

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你在实验室发生过哪些有趣的事情?

学过化学,懂点生物 从高中开始说吧 某同学浓硫酸和铜反应,煮了十多分钟没反应过来问我,怎么还没变化啊,我一看,这货没放铜?? 会考的卤素实验,溴水不够了,倒霉的是县里面就一个卖试剂的,也没储备,于是出损招,配氯化铁溶液,然后每瓶滴一点溴水,反正置换碘,颜色味道现象全一样,直到高中毕业他们都不知道当时是被这么忽悠的。 准备蛋白质变性实验,苏老师买了两斤鸡蛋,鸡蛋清配成蛋白液了,鸡蛋黄直接用酒精锅烤 ...

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 避孕药

网络 第四节 避孕药   使用避孕药是计划生育的一项重要措施。   生殖过程是一个复杂的生理过程,包括精子和卵子的形成与成熟、排卵、受精、着床以及胚胎发育等多个环节,阻断其中任何一个环节都可以达到避孕和终止妊娠的目的。这些环节多发生在女性体内,这使女性避孕药较男性避孕药发展为快。   与其他药物比较,避孕药有下列几个特点:①应用广,例如女用口服 ...

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 避孕药

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 雄激素类药和同化激素类药

网络 第三节 雄激素类药和同化激素类药   一、雄激素类药   【来源】天然雄激素(androgens)主要是睾丸间质细胞分泌的睾酮(睾丸素,testosteron0一些新衍生物,临床常用的为甲睾酮(android;甲基睾丸素,methyltestosterone)、丙酸睾酮(andronate;丙酸睾丸素,testosterone  propion ...

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 雄激素类药和同化激素类药

网络 第三节 雄激素类药和同化激素类药   一、雄激素类药   【来源】天然雄激素(androgens)主要是睾丸间质细胞分泌的睾酮(睾丸素,testosteron0一些新衍生物,临床常用的为甲睾酮(android;甲基睾丸素,methyltestosterone)、丙酸睾酮(andronate;丙酸睾丸素,testosterone  propion ...

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 孕激素类药

网络 第二节 孕激素类药   【来源】孕激素(progestogens)主要由卵巢黄体分泌,妊娠3~4个月后,黄体逐渐萎缩而由胎盘分泌代之,直至分娩。在近排卵期的卵巢及肾上腺皮质中也有一定量的孕激素产生。自黄体分离出的天然孕激素为黄体酮(孕酮,progesterone)含量很低。临床应用的是人工合成品及其衍生物。   【分类】孕激素类按化学结构可分为 ...

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