更多资讯

目的要求（1）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。（2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。实验原理由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的 ...

1．报告基因检测受多种因素影响（载体状态、细胞状态、转染量、转染效率、裂解效率、加样精度、检测过程等），因此同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔，并且引入另一个报告基因作为内参。2．细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好；长时间培养后，细胞难裂解。3．双荧光素酶报告基因的载体选择：a)萤火虫荧光素酶建议选取pGL-3或pGL-4的载体或自己构建相应的载体；b)海肾 ...

1 应用说明编码β-半乳糖苷酶(Gal)的基因已商业化地运用到报告基因研究的各种层面，重组的β-Gal已得到成熟的运用，以此用来研究启动子的功能、组织特异性表达、发育调控、mRNA的稳定性以及各种细胞器靶向蛋白的信号序列。应用β-Gal来测定启动子和基因的活性具有双重优点；检测方法简单，用于酶活性分析的底物容易获得，使用TBS-380微型荧光计对溶液中β-G ...

1. 应用说明在分子生物学的许多试验中，DNA定量都是一个很重要的步骤。用到DNA的常用技术有序列分析、cDNA合成和克隆、RNA转录、转染、核酸标记（比如随机引物标记）等等，这些试验的好坏取决于所使用模板浓度，对所用DNA模板浓度错误估计往往是导致这些实验失败的最直接原因。核酸的浓度通常用紫外，在260nm波长处，测吸光值获得，检测中的灵敏性会受到很高的背景干扰。Hoechst 33258，一种 ...

1. 应用说明AcGFP1是从水母（Aequorea coerulescens）中分离出来的荧光蛋白，是EGFP的优良的代替品。AcGFP1的特性与EGFP相似，AcGFP1的激发波峰为475nm，发射波峰为505nm。此外，AcGFP1与EGFP在核酸水平上有94%的同源性。AcGFP1的特点是具有进行了人类密码子优化的开放阅读框。这不仅提高了AcGFP1 mRNA的转化效率同时也提高了它在高等 ...

1．应用说明疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。其中，疫苗的纯化是关键问题，我们需要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。常规的DNA含量的检测方法是在260nm（A260）处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号 ...

将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种，这些方法各个实验室都有用过，但最常用的是使用转染试剂，这些转染试剂有的是阳离子脂质体，有的则不是。下文除了介绍各种转染方法外，在文章末尾还列出了常用的RNAi转染试剂。1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过 ...

在进行染色质荧光原位杂交以及其他与染色体相关实验方法中，制备染色体是实验的第一步，本文就此对体外传代培养的细胞，外周血细胞，羊水细胞的染色体制备方法进行介绍。1） 传代培养细胞染色体显示法1．培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80％～90％汇合单层培养细胞。2．加秋水仙素：使用最终浓度为0.02～0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6～10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下 ...

外界物理因素:温度、湿度 化学因素：pH值、水解反应、氧化反应 生物因素：酶解及微生物侵染等作用。这些因素都直接与DNA的构型、分子组成有关DNA分子结构： DNA是由许多脱氧核苷酸残基按一定顺序彼此用3’，5’-磷酸二酯键相连构成的长链。 ；大多数DNA含有两条这样的长链 也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。有的DNA为环形，有的DNA为线形。一般用几个层次 ...

王 薇1 邵超鹏21 乌鲁木齐市中心血站 8300002 深圳市血站 518020　　摘要 本文重点介绍两种改良的小量DNA提取方法：快速酚－氯仿法和氯化钠(NaCl)盐析法，并分别采用新鲜全血和冰冻全血制备DNA，分析两种方法提取DNA的收获量和OD260/OD280比值以及方法本身的难易、耗时及费用等。结果显示酚－氯仿法简便快速，全过程不到30分钟，而NaCl盐析法DNA收获率高纯度高，且避 ...

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼 ...

1． 如何做酶切反应？ 该问题看似什么简单： DNA中加上酶，然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中，我们不断听到：切不动，装不上。问题在什么地方？能系列生产限制性内切酶的公司国际上，就那么几个，位列前3 的是NEB Fermentas SibEnzyme。这些公司提供酶的品质一般都能得到保证。您可以怀疑酶的质量问题，但是更多的问题来源于模板是否合适酶切要求。下面几点对你的酶切是有帮助的。 ...

简单序列长度多态性（simple sequence length polymorphism，SSLP）是据串联重复排列微卫星基序两侧的单一序列设计引物，对微卫星序列（microsatellite DNA或simple sequence repeats，SSR）进行扩增，由微卫星基序重复数目的变异而产生多态性。由于中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列，因而可以将微卫星侧翼的DNA ...

　　 DNA片段的分离与回收是基因工程操作中一项重要的技术如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针回收PCR产物用于再次鉴定等。 (责任编辑：admin) ...

　　Amberg Lab Upstate Medical University DNA.html" Grow 100 ml culture to about 1x10 to the 8th Spin 4 x 15 mls of culture down about 3k x 3 min. Resuspend entire pool in about 6 mls ddH2O ...

　　目的要求 学习和掌握从动物组织中提取核酸的原理和操作技术了解提取DNA/RNA的几种方法，原理和优缺点学习测定DNA/RNA含量的基本原理及具体方法。实验原理核酸和蛋白质是构成生物有机体的主要成分；核酸是生命的最基本物质。在生物体中它们结合成核蛋白的形式存在。核酸按其化学组成可以分成两大类，一类含D-2-脱氧核糖的称为脱氧核糖核酸（DNA），主要存在于细胞核中；另一类含D-核糖的称为核糖核酸（ ...

　　一、操作步骤： 1.取15ml研磨器，加入5ml血块，4-5ml溶血试剂，研磨至无凝块存在。转移到50ml离心管中，2500rpm，10min。 2.去上清，假溶血试剂清洗一遍，2500rpm，10min，至无红色存在。 3.去上清，加1ml细胞裂解液，转移到离心管，加20mg/ml蛋白酶K 10ml，56℃水浴，3小时。 4.每管加1ml平衡酚，混匀，6000rpm，10min。 5.重复 ...

1.原理 DNA定量分析是DNA分子操作过程中一个必不可少的过程，常用的有两种方法。（1）紫外光谱分析法。核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，260nm处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸浓度成正比。核酸分子的单链、双链之间的转换，对光吸收水平有一定影响，但其偏差可用特定的公式进行校正。（2）EB荧光分析法。EB即溴化乙锭，它能插入DNA或RNA的碱基对平面之间并与 ...

核酸序列预测分析的基本思路：当我们得到一个DNA序列时，一般都需要对该片段进行分析，确定它的功能区域，寻找调控区域、编码区域，预测其编码蛋白，这些就是我们研究DNA序列的目的。核酸序列的预测就是在核酸序列中寻找基因，找出基因的位置及功能位点，以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中，确认一段DNA序列是一个基因需要有多个证据的支持：1、一般而言，在重复片段频繁出现的区域里，基因编码区和调控区不太可 ...

1977年， A.M. Maxam 和 W. Gilbert 首先建立了 DNA 片段序列的测定方法，其原理为：将一个 DNA 片段的 5' 端磷酸基作放射性标记，再分别采用不同的化学方法修饰和裂解特定碱基（表 6-1），从而产生一系列长度不一而 5' 端被标记的 DNA 片段，这些以特定碱基结尾的片段群通过凝胶电泳分离，再经放射线自显影，确定各片段末端碱基，从而得出目的 DNA ...