oligo DNA 分子量和摩尔数的计算

一般oligo DNA 分子量计算公式如下：

MW=（A碱基数×312）+（C碱基数×288）+（G碱基数×328）+（T碱基数×303）-61
OligoDNA的分子量也可以用以下近似方法计算: OligoDNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条 OligoDNA的分子量=碱基数×324.5。

例:您得到一管标为 5OD260nm 的20mer OligoDNA

分子量=20×324.5=6490

质量数=5×33=165ug

摩尔数=165/6490=0.025umol=25nmmol

若加双蒸消毒水或TE buffer400ul溶解,则浓度为25nmol/400ul=62.5uM

这里的 OD 值是指 DNA 制品溶解在1ml无菌水中的260nm 的吸光度值。

Oligo DNA的Tm值

引物设计软件都可以给出Tm，与引物长度，碱基组成，引物使用缓冲的离子强度也有关。

长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：

Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)

对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：

Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size

公式中，Size = 引物长度。

最适退火温度（Ta Opt ）= 0.3×(Tm of primer)0.7×(Tm of product)–25

引物Tm值与PCR产物Tm值相差一般不超过30℃，一般采用较引物Tm值低5℃作为PCR退火温度。兼并碱基TM值可以折算。

(责任编辑：大汉昆仑王)