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        质粒图谱大全·如何阅读质粒图谱

        互联网

        3964

        一.九种表达载体
        Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,
        pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA
        二.克隆载体
        pTZ19RDNA
        pUC57DNA
        PMD18T
        PQE30
        pUC18
        pUC19
        pTrcHisA
        pTrxFus
        pRSET-A
        pRSET-B
        pVAX1
        PBR322
        pbv220
        pBluescriptIIKS( )
        L4440
        pCAMBIA-1301
        pMAL-p2X
        pGD926
        三.PET系列表达载体
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44
        ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA
        ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits

        四.PGEX系列表达载体
        TEcoR?pGEX-1I/BAP
        pGEX-2T
        pGEX-2TK
        pGEX-3X
        pGEX-4T-1
        pGEX-4T-2
        pGEX-4T-3
        pGEX-5X-1
        pGEX-5X-2
        pGEX-5X-3
        pGEX-6P-1
        pGEX-6P-2
        pGEX-6P-3

        五.PTYBsystem
        PTYB1
        PTYB2
        PTYB11
        PTYB12
        六.真核表达载体
        pCDNA3.1(-)
        pCDNA3.1( )
        pPICZalphaA
        pGAPZαA
        PYES2.0
        pBI121
        pEGFP-N1
        pEGFP-C1
        pPIC9K
        pPIC3.5K
         如何阅读分析质粒图谱

        载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
        一、一个合格质粒的组成要素
        复制起始位点Ori?即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
        抗生素抗性基因可以便于加以检测,如Amp ?,Kan
        多?克隆位点MCS克隆携带外源基因片段
        P/E?启动子/增强子
        Terms终止信号?
        加poly(A)信号?可以起到稳定mRNA作用

        二、如何阅读质粒图谱
        第一步:首先看Ori的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)
        第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记。
        (1)Ampr水解β-内酰胺环,解除氨苄的毒性。
        (2)tetr可以阻止四环素进入细胞。
        (3)camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性。
        (4)neor(kanr)氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活
        (5)hygr使潮霉素β失活。
        第三步:看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
        第四步:再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低。
        第五步:是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体,还是要以实验目的为准绳。
        启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
        启动子-促进DNA转录的DNA顺序,这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录。?
        增强子/沉默子-为真核?基因组(包括真核病毒基因组)中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子-负增强子,负调控序列。
        核糖体结合位点/起始密码/SD序列(Rbs/AGU/SDs):mRNA有核糖体的两个结合位点,对于原核而言是AUG(起始密码)和SD序列。?
        转录终止顺序(终止子)/翻译终止密码子:结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down-stream有一段GT或T富丰区,这2部分共同构成poly(A)加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down-stream有一段GT或T富丰区,这2部分共同构成poly(A)加尾信号。?

        回答有人之前提出的一个问题:为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针,那其实是代表两条DNA链,即质粒是环状双链DNA,它的启动子等在其中一条链上,而它的抗性基因在另一条链上.

        三、介绍一下关于载体的知识(虽然课本上都有写) (责任编辑:大汉昆仑王)

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