材料与仪器
器材：高速离心机，涡旋振荡器
试剂：PKH26 linkeundefined20 μL(红色染料）PKH67 linkeundefined20 μL（绿色染料），Diluent undefined200 μL，1 × PBS
耗材：50 mL 离心管，1.5 mL 离心管
步骤
一、 染料工作液制备：
用 「Diluent C」 将 「PKH26 linker（ for red fluorescent cell labeling）」储存液稀释 10 倍，配制浓度为 100 μM 的染料工作液 （避光操作，工作液应根据实验用量适当配置，现配现用）。
二、 外泌体染色：
1、 在外泌体中加入染料工作液，建议染料终浓度为 5 μM（可在 2~20 μM 范围调节）；（建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到 0.5~1 μg/μL。外泌体浓度过低实验失败风险较高）
2、 加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再静置孵育 10 min；
3、 向孵育后的外泌体染料复合物中加入适量 1 × PBS 混匀；
4、 按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除游离染料；（这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。）
5、取 200 μL 1 × PBS 重悬沉淀物，即为染色后的外泌体。（注意：过度染色会导致外泌体膜完整性丧失，PKH26 染料/PKH67 染料/外泌体的最佳用量需根据自身实验而决定。）
来源：丁香实验
