外泌体荧光标记染料染外泌体流程（DiR-近红外）

一、 染料工作液制备

将「外泌体荧光标记染料（DiR）」用 1 × PBS 稀释 10 倍，配制成浓度为 100 μM 的染料工作液。

二、 外泌体染色

1、 在外泌体悬液中加入染料工作液，建议染料终浓度为 10~20 μM（按照终体积的 1/5~1/10 加入 100 μM 的染料工作液）；（建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到 0.5~1.5 μg/μL，外泌体浓度过低实验失败风险较高。）

2、 加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 37℃ 孵育 30 min；

3、 向孵育后的外泌体-染料复合物中加入 10 mL 的 1 × PBS 混匀；

4、 按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除游离染料；（这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。）

5、取 200 μL 1 × PBS 重悬沉淀物，即为染色后的外泌体。