简介
酶联免疫吸附实验（ELISA）测定 IFN-γ 细胞因子方法是利用 ELISA 实验测定细胞因子 IFN-γ。
材料与仪器
器材：
细胞培养箱、分光光度计、96 孔板等。
试剂：
① 抗体
② 含 0.05% Tween20 的 PBS（PBST）
③ 含 1% BSA 或 10% FBS 的 PBST
④ 终止液
步骤
酶联免疫吸附实验（ELISA）测定 IFN-γ细胞因子方法的基本流程如下：
（1）将用前述方法建立的抗原特异性 CD4＋T 细胞克隆、刺激后 PBMC 或刺激后 CD4＋T 细胞铺于 96 孔细胞培养板，每组设 3 复孔。按 1:2～10:1 的比例加入用前述方法制备的 APC。共培养 18～24 小时后，收集上清。
（2）于 96 孔 ELISA 板，加入 100 μl 稀释后捕获抗体，4 ℃ 孵育过夜。弃去孔内溶液，用含 0.05% Tween20 的 PBS（PBST）洗涤 3 次后，用含 1% BSA 或 10% FBS 的 PBST 封闭。
（3）洗涤后，加入稀释后上清 100 μl，37 ℃ 孵育 1 小时。用 PBST 洗涤 3 次后，每孔加入新鲜稀释的酶标抗体，37 ℃ 孵育 0.5～1 小时，洗涤。
（4）加入新鲜配制的底物溶液 100 μl。37 ℃ 孵育 10～30 小时后，加入终止液终止反应。
（5）测定 415 nm 或 450 nm 吸光度值（A 值），绘制标准曲线，确定 cut off 值，根据样品 A 值计算测定样品的浓度。
来源：丁香实验
