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        组织TNF-a表达用什么方法看

        相关实验:Th细胞表位的鉴定

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        小白看处方

        图片描述在做大鼠神经组织(背根神经节)TNF-alpha的ELISA,用的是R&D的盒子,做了三四次了,标准品的吸光度很稳定,但是样品就是出不来

        求各位大佬帮忙分析:

        1. 组织提取:100mg组织加100ul含蛋白酶抑制剂PBS,匀浆至无组织碎片。12000g 4度离心10min取上清。BCA定量800-1000ug/ml。

        2. 样品稀释和ELISA操作严格按照说明书(如图)

        3.孔加样:板条剪开,2-3个蛋白样品(稀释液➕蛋白溶液)一个空白对照(稀释液➕提蛋白用的含酶抑制剂PBS),一个阳性对照(标准品母液稀释到50pg/ml)

        结果就是每次阳性对照有吸光度,做过两次标曲梯度也没问题, 样品就是和空白没什么差别……

        求助大家:

        1. 有没有大佬做过神经组织TNF-a的ELISA,是表达量本来就很低还是我的操作有问题嘞?

        2. 组织TNF-a表达用什么方法看嘞

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        3 个回答

        user-title

        vae1476

        有帮助

        可以用免疫组化,免疫荧光看,比较直观,也可以裂解成细胞,RTPCR或者WB来看

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        注意用排枪,可以考虑提RNA跑qPCR

        user-title

        未来9

        有帮助

        TNF-a有其对应的mRNA片段,提取RNA,合成cDNA,进行扩增,做定量PCR,看基因表达水平

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