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        抗原特异性CD4+T细胞克隆的建立

        相关实验:Th细胞表位的鉴定

        最新修订时间:

        材料与仪器

        器材:

        100 目筛网、离心机等。

        试剂:

        ① 淋巴细胞分离液;

        ② 2~10 μg/ml 抗原;
        ③ 丝裂霉素 C;
        ④ 10~20 IU/ml IL-2。

        步骤

        抗原特异性 CD4T 细胞克隆的建立的基本过程可分为如下几步:

        1.分离获得 TIL、淋巴结细胞、PBMC 采用常规组织淋巴结分离方法如分离淋巴结后,100 目筛网研磨分离获得 TIL 或淋巴结,淋巴细胞分离液密度梯度离心法获得 PBMC。

        2.加入 2~10 μg/ml 抗原,37 ℃、5% CO2 培养。1 周后,重复刺激 1 次。

        3.用与抗原孵育过的、照射后或丝裂霉素 C 处理后 APC 刺激细胞,每 1~2 周刺激 1 次。

        4.每次刺激后 1~2 天,加入 10~20 IU/ml IL-2。

        5.稀释刺激后细胞,铺于 96 孔细胞培养板(0.3、1、3 或 10 个细胞/孔),加入 IL-2 和 APC 进行刺激。重复刺激 2 次后,进行细胞增殖检测。

        6.用上述方法再次刺激阳性克隆,获得抗原特异性 CD4T 细胞克隆。

        来源:丁香实验

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