比色法（考马斯亮蓝法）测定蛋白质总含量

最新修订时间：2022-02-10

简介

考马斯亮蓝法操作简单快速，近年来在某些方面有取代经典 Lowry 法的趋势。

原理

比色法（考马斯亮蓝法）测定蛋白质总含量的基本原理是考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）G-250 在一定浓度的乙醇和酸性溶液中呈红色。在此溶液条件下，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合，并导致考马斯亮蓝 G-250 的颜色从红色变为蓝色，最大光吸收峰从 465nm 移至 595nm 。考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质的复合物在 595nm 波长处具有很高的光吸收系数，并与溶液中的蛋白质浓度呈正比。

材料与仪器

器材：分光光度计或酶标仪

试剂：

①考马斯亮蓝 G-250

②95％酒精

③85％浓磷酸

④H₂O

步骤

比色法（考马斯亮蓝法）测定蛋白质总含量基本过程可分为如下几步：

A．染料溶液制备

考马斯亮蓝 G-250 0.1g 溶于 95％酒精50ml，再加 85％的浓磷酸 100ml，用 H₂O 稀释至 1 000ml，混匀备用

B. 将染料溶液加入标准品或样品溶液中，混匀后室温放置 5 分钟，用分光光度计或酶标仪测定吸光度即可。