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        比色法(考马斯亮蓝法)测定蛋白质总含量

        相关实验:基于蛋白质化学呈色反应测定蛋白质总含量

        最新修订时间:

        简介

        考马斯亮蓝法操作简单快速,近年来在某些方面有取代经典 Lowry 法的趋势。


        原理
        比色法(考马斯亮蓝法)测定蛋白质总含量的基本原理是考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue)G-250 在 一定浓度的乙醇和酸性溶液中呈红色。在此溶液条件下,考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合,并导致考马斯亮蓝 G-250 的颜色从红色变为蓝色,最大光吸收峰从 465nm 移至 595nm 。考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质的复合物在 595nm 波长处具有很高的光吸收系数,并与溶液中的蛋白质浓度呈正比。




        材料与仪器

        器材:分光光度计或酶标仪
        试剂:
        ①考马斯亮蓝 G-250
        ②95% 酒精
        85% 浓磷酸
        H2O


        步骤

        比色法(考马斯亮蓝法)测定蛋白质总含量基本过程可分为如下几步:

        A.染料溶液制备

        考马斯亮蓝 G-250 0.1g 溶于 95% 酒精50ml,再加 85% 的浓磷酸 100ml,用 H2O 稀释至 1 000ml,混匀备用

        B. 将染料溶液加入标准品或样品溶液中,混匀后室温放置 5 分钟,用分光光度计或酶标仪测定吸光度即可。


        注意事项

        1.在蛋白质浓度过高时,反应时间过长易发生沉淀,应该尽可能在 10 分钟内测完标准品和样品,减少误差。

        2.最好使用一次性的比色杯或者多孔板,着色后的杯子很难洗净。


        来源:丁香实验

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