• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        分光光度计法测定还原反应

        相关实验:L-乳酸脱氢酶测定实验

        最新修订时间:

        原理

        乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)广泛存在于生物细胞内,是糖代谢酵解途径的关键酶之一。LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多,其中紫外分光光度法更为简单、快速。鉴于NADH,NAD+在340nm及260nm处有各自的最大吸收峰,因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值的改变,定量测定酶的含量。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        一、试剂:


        0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0


        0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于10 ml H2O 中)


        0.1mol/l 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110;110 mg溶于10 ml H2O 中)。


        LDH 原料溶液(从猪心脏提取,例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0 稀释至 1 IU/ml)


        二、LDH活力测定


        1. 取1只比色杯中加入0.1 m mol/L pH7.5 磷酸氢二钾缓冲液3ml,置于紫外分光光度计中,在340nm处将光吸收调节至零。


        2. 取1只比色杯,依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml,NADH溶液0.1ml,加盖摇匀后,加入经稀释的酶液10μl,加盖摇匀后,在A340nm,连续测定3min,以A对时间作图,取反应最初线性部分,计算A340nm/min减少值。


        三、数据处理


        计算每毫升组织提取液中LDH活力单位。

        注意事项

        加入酶液的稀释度(或加入量)应控制在A340nm/min减少值在0.1-0.2之间。

        常见问题


        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序