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        UIP 法

        相关实验:多聚螯合物酶组化实验

        最新修订时间:

        原理

        UIP(universal immuno-enzyme polymer)法,即通用免疫酶复合物法,是 Nichirei 发明的一种新型免疫组化染色方法。其基本原理及工作流程与 EnVision 法相似,不同的是 UIP 复合物为 HRF 氨基酸-抗鼠或抗兔 IgG 复合物(N-Histofine 复合物)。因 N-Histofine 复合物相对分子质量较 EnVision 复合物相对分子质量稍小,理论上具有更强的穿透力。

        材料与仪器

        步骤

        1. 4 μm 常规石蜡切片经烤片后,常规二甲苯、乙醇脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。


        2. 预处理组织切片(可用酶消化或 AR 或不作任何处理,依一抗质量而定)。


        3. PBS 洗 3 min×3 次。


        4. 0.3% H2O2 阻断内源性过氧化物酶 15 min,PBS 洗 3 min×3 次。


        5. 适当稀释特异性一抗,37℃ 孵育 1 h,PBS 洗 3 min×3 次。


        6. N-Histofine 复合物(HRF 氨基酸-抗鼠或抗兔 IgG 复合物)孵育 30 min,PBS 洗 3 min×3 次。


        7. 水洗,复染,常规树胶封片。


        8. 结果观察。

        注意事项

        UIP 法缺点是多聚物中有 N 末端暴露,形成的电荷能和组织细胞发生静电吸附,可造成非特异性染色,染色时需平衡静电荷。

        来源:丁香实验

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