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        EnVision 法

        相关实验:多聚螯合物酶组化实验

        最新修订时间:

        原理


        抗原-抗体反应结合后,第二抗体上标记有多聚化合物(葡聚糖)酶复合物(EnVision 复合物),与第一抗体结合,进而由酶作用底物进行显色定位。EnVision 复合物是利用一种多聚化合物将 HRP 或 AKP 和第二抗体(抗鼠或抗兔 IgG)同时标记在一个多聚化合物上,即形成酶-多聚化合物-第二抗体巨大复合物。每 1 个分子的复合物中约含 70 个分子的 HRP 和 10 个分子的第二抗体,复合物中的 HRP 的绝对数量远高于其他复合物(如 ABC),本身已具备高度放大作用,因此 EnVision 法敏感性显着高于其他方法。复合物中存在多个第二抗体,也增加了该复合物与特异性抗体的结合机会。同时,人体内不存在该多聚化合物,无非特异性干扰,故背景染色浅。此外,染色步骤为两步,且第二抗体孵育时较短,使该方法更省时而简便。


        EnVision 法

        材料与仪器

        步骤

        1. 4 μm 常规石蜡切片经烤片后,常规二甲苯、乙醇脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。


        2. 预处理组织切片(可用酶消化或 AR 或不作任何处理,依一抗质量而定)。


        3. PBS 洗 3 min×3 次。


        4. 0.3% H2O2 阻断内源性过氧化物酶 15 min,PBS 洗 3 min×3 次。


        5. 适当稀释特异性一抗,37℃ 孵育 1 h,PBS 洗 3 min×3 次。


        6. EnVision 复合物(即用型)孵育 30 min,PBS 洗 3 min×3 次。


        7. 水洗,复染,常规树胶封片。


        8. 结果观察。

        来源:丁香实验

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