粗制品的DNA酶足迹分析法

DNA酶足迹分析常用来寻找粗制品中的蛋白质，因而提供了一种在纯化过程中采用的分析方法。通过改变条件，如在反应体系中加入大量的竞争性DNA，或增加反应中盐的浓度，可抑制非特异性的DNA结合蛋白结合到标记的DNA上。

1) 同基本方案中的步骤1〜7制备32P单末端标记的DNA。

2) 从各稀释度中找出能产生约50%无切口 DNA (0. 1 mg/mL)的DNA酶I浓度。建 立一个200μL的包括探针和分析缓冲液的反应体系，但不加蛋白质，如基本方案的步骤10。加入5μL稀释的DNA酶I，轻轻混合，稍加离心。

3) 温育2 min,如基本方案步骤18所述终止反应。乙醇沉淀，在测序胶上分析反应产物。

4) 按基本方案进行足迹反应。不同的是，用恒定体积的、已知具有所需活性的粗组分代替不同量的蛋白质。进行一组不同分析条件的实验来寻找合适的 反应条件。